神經酰胺調節(jié)酒精誘導小鼠神經細胞增殖的實驗研究.pdf

1、隨著社會經濟的發(fā)展、社會交流的頻繁，酒精類飲料已逐漸成為人們常見的飲品之一；自1899年德國醫(yī)生William Sullivan發(fā)現(xiàn)孕婦飲酒會影響胎兒以來，酒精對胎兒的毒理作用逐漸引起人們的關注。科學家們研究發(fā)現(xiàn)，酒精不僅影響胎兒生長發(fā)育，引成各臟器的畸形，而且嚴重損害胎兒中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育。酒精可通過多種途徑作用于中樞神經系統(tǒng)，多引起神經細胞發(fā)生程序性凋亡或自噬增加，造成神經細胞暫時性功能缺失，常見神經損傷部位包括海馬和小腦，其中小腦

2、受損將引起共濟失調，而海馬神經細胞缺失會引起近記憶喪失、認知障礙等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，酒精可影響神經細胞的增殖，但其具體機制尚不十分清楚。我們利用神經鞘磷脂合成酶
　　 2基因敲除(sphingomyelin synthase2 knockout，SMS2-/-)小鼠建立孕期酒精暴露模型，試圖從神經酰胺途徑進一步研究酒精的神經毒理作用及其機制，為探討酒精暴露、神經酰胺以及神經細胞增殖三者之間的相互聯(lián)系提供理論依據(jù)，并為治療和預防神

3、經系統(tǒng)疾病引起的神經損傷提供新的治療方略及方法。
　　 目的:
　　 探討神經酰胺在酒精誘導神經細胞增殖及新生神經元形成過程中的作用及其作用機制。
　　 方法:
　　 利用SMS2-/-小鼠建立孕期酒精暴露模型，用酶學法檢測P0仔鼠血清神經鞘磷脂(sphingomyelin，SM)水平，利用免疫熒光染色法觀察各分組仔鼠齒狀回神經細胞增殖、新生神經元及PKCα在腦組織中的表達，免疫印跡技術檢測P7仔鼠海馬組

4、織PKCα蛋白的相對表達量。
　　 結果:
　　 1．由于SMS2基因的缺失，SMS2-/-仔鼠血清SM水平明顯低于野生型(Wildtype，WT)仔鼠(P＜0.01)；無論是SMS2-/-仔鼠還是WT仔鼠，酒精暴露后其血清SM水平降低(P＜0.05)且具有劑量依賴性(P＜0，05)。
　　 2.無論是SMS2-/-仔鼠還是WT仔鼠，其齒狀回神經細胞增殖的數(shù)量及新生神經元隨年齡的增長而減少且一直持續(xù)到成年；與WT

5、仔鼠相比，SMS2-/-仔鼠齒狀回神經細胞增殖的數(shù)量及新生神經元較多(P＜0.05)；酒精暴露后，兩基因組仔鼠齒狀回神經細胞增殖的數(shù)量及新生神經元隨酒精劑量的增加而增多且酒精組明顯多于對照組(P＜0.01)，高劑量組多于低劑量組(P＜0.05)，存在劑量依賴性。
　　 3.PKCα是C1P通路中重要的激活蛋白，其主要表達于胞膜，在海馬、齒狀回、腦皮質中均有表達；與WT仔鼠相比，SMS2-/-仔鼠海馬組織PKCα蛋白的表達量較低(

6、P＜0.05)；酒精暴露后，兩基因組仔鼠海馬組織PKCα蛋白的表達量隨酒精劑量的增加而增高(P＜0.05)且具有劑量依賴性。
　　 結論:
　　 SMS2基因的缺失使血清SM水平降低，可導致神經酰胺在神經細胞內蓄積；孕期酒精暴露能夠誘導神經細胞發(fā)生代償性增殖及新生神經元的形成，神經酰胺通路參與酒精誘導細胞增殖的過程；同時，PKCα是Cer-C1P級聯(lián)反應中重要的激活蛋白，可上調神經酰胺調控酒精誘導神經細胞增殖及新生神經元