VE-cadherin重組腺病毒偶聯(lián)氧化型甘露聚糖抗腫瘤實驗研究.pdf

1、目的：以血管為靶向的抗血管治療已成為目前抗腫瘤治療的一種新策略。VE-cadherin(Vascularendothelial-cadherin，血管內皮鈣粘附素)是內皮細胞特異性粘附分子，對其正常生理具有重要作用，抑制VE-cadherin可作為抗腫瘤新生血管形成的治療手段。樹突狀細胞(DC)是機體強有力的抗原遞呈細胞(APC)，細胞表面高表達甘露糖受體(MR)，能介導高效的抗原識別與攝取作用。本研究擬通過制備重組鼠VE-cadher

2、in腺病毒，經(jīng)氧化型甘露聚糖修飾，觀察在小鼠腫瘤模型中抗腫瘤血管免疫效應并進行初步分析。 方法：從小鼠胚胎提取總RNA，RT-PCR擴增小鼠VE-cadherin全長cDNA基因。經(jīng)T-A克隆并作酶切鑒定和測序確認，進一步酶切將目的基因連接到穿梭質粒載體。酶切鑒定后與病毒骨架質粒在電擊下共轉化，發(fā)生同源重組形成重組腺病毒質粒。經(jīng)過鑒定，轉染包裝，篩選，擴增，純化，制備高滴度重組病毒。在體外經(jīng)氧化型甘露聚糖修飾(簡稱AdVEC-m

3、)后腹腔注射免疫小鼠。觀察AdVEC-m對小鼠LLC，CT26腫瘤的保護或治療效應以及抗轉移效應；對腫瘤組織切片內微血管作CD31免疫組化染色；利用藻酸鹽包裹腫瘤細胞實驗觀察對小鼠體內腫瘤血管生成抑制情況；通過ELISA、Westernblot檢測抗體對抗原的識別能力；51Cr釋放法檢測脾T細胞及抗體對內皮細胞的特異殺傷活性；同時T細胞亞群阻斷實驗觀察不同T細胞亞群在抗腫瘤效應中的作用。 結果：制備高滴度重組小鼠VE-cadhe

4、rin腺病毒，經(jīng)氧化型甘露聚糖反應修飾，能有效誘導抗腫瘤效應。表現(xiàn)為AdVEC-m治療組腫瘤生長緩慢，小鼠生存期延長，肺轉移結節(jié)數(shù)明顯少于對照組，腫瘤組織內微血管密度降低，體內藻酸鹽微球表面及內部血管生成減少。免疫學分析顯示AdVEC-m能激發(fā)小鼠特異的體液及細胞免疫反應，51Cr釋放實驗顯示內皮細胞特異性的CD8+細胞毒殺傷效應，以及CDC(補體依賴性細胞毒性)和ADCC(抗體依賴性細胞的細胞毒性)。CD4+及CD8+淋巴細胞亞型去除