NDV、IL-12及NDV+IL-12聯(lián)合應(yīng)用抗S180肉瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：國(guó)內(nèi)外對(duì)新城疫病毒抗腫瘤作用的報(bào)道較多，但是關(guān)于。NDV和IL-12聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行抗腫瘤作用的研究，尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究在課題組證實(shí)新城疫病毒(NDV)對(duì)體內(nèi)、外S180肉瘤均有抗腫瘤效應(yīng)的工作基礎(chǔ)上，分別利用NDV、白細(xì)胞介素(IL-12)單獨(dú)治療及NDV+IL-12聯(lián)合治療荷瘤小鼠，對(duì)比單獨(dú)應(yīng)用NDV或IL-12和NDV+IL-12聯(lián)合應(yīng)用的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)，為更深入研究NDV抗腫瘤作用機(jī)制、聯(lián)合用藥和研制抗腫瘤疫苗提供理論依據(jù)。

2、 方法：給昆明種小鼠左后肢皮下接種濃度為1×107/ml的S180細(xì)胞0.2ml/只。把80只荷瘤小鼠隨機(jī)分為四組：生理鹽水組、NDV治療組、IL-12治療組、NDV+IL-12聯(lián)合治療組，每組20只。分別在接種瘤細(xì)胞后第7、14、21天瘤旁注射生理鹽水、NDV、IL-12、NDV+右后肢皮下注射IL-12。在接種瘤細(xì)胞后第28天，每組小鼠各取10只，分別摘除眼球取血，流式細(xì)胞儀分析外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD

3、8比值的變化；頸椎脫臼處死后無(wú)菌取脾細(xì)胞，進(jìn)行CTL細(xì)胞殺傷活性的測(cè)定；完整剝離腫瘤組織，稱取瘤重，計(jì)算瘤指數(shù)和抑瘤率、并制作石蠟切片，進(jìn)行光鏡形態(tài)學(xué)觀察。其余小鼠，定期觀察小鼠的飲食及身體狀況、測(cè)量腫瘤大小。 結(jié)果： 1.NDV、IL-12、NDV+IL-12對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響 各組小鼠在接種腫瘤細(xì)胞7天左右開(kāi)始觸摸到瘤塊,第14天時(shí)，生理鹽水組、NDV組、IL-12組、NDV+IL-12組的腫瘤大小分別達(dá)到

4、(8.52+0.46)mm、(7.76±0.20)mm、(7.56±0.09)mm、(4.8±0.59)mm，此后治療組的腫瘤逐漸縮小，到27天時(shí)，腫瘤大小分別為(4.58±2.13)mm、(5.12±1.56)mm、(2.68±0.57)mm明顯小于生理鹽水組(15.34±3.18)mm。其中，NDV+IL-12聯(lián)合治療組的小鼠腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，其中有5只小鼠腫瘤全部消退。 NDV、IL-12、NDV+IL-12實(shí)驗(yàn)組的抑

5、瘤率分別為(30.26±9.25)％、(31.85±7-24)％、(48.96±3.80)％。NDV+IL-12聯(lián)合治療組的抑瘤率比NDV、IL-12單獨(dú)治療組的抑瘤率要具有顯著性差異。NDV+IL-12組的抑瘤作用最為明顯，提示NDV和IL-12在抗腫瘤方面具有協(xié)同作用。 生理鹽水組小鼠的瘤指數(shù)為7.067±0.67，NDV組、IL-12組、NDV+IL-12組的小鼠瘤指數(shù)分別為5.26±0.49、5.51±1.35、3.95

6、±0.49，明顯低于生理鹽水組；NDV組、IL-12單獨(dú)治療組小鼠的瘤指數(shù)與NDV+IL-12組相比具有顯著性差異；NDV組小鼠瘤指數(shù)與IL-12相比，無(wú)明顯變化。 2.各組荷瘤小鼠CTL活性測(cè)定結(jié)果及比較 NDV、IL-12單獨(dú)治療組和NDV+IL-12聯(lián)合治療組的CTL活性與生理鹽水組相比具有顯著性差異；NDV+IL-12組的CTL活性顯著高于NDV、IL-12組的CTL活性；IL-12組的CTL活性明顯低于NDV組

7、。 3.各組荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群測(cè)定結(jié)果 NDV、IL-12、NDV+IL-12組的荷瘤小鼠外周血中CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)均高于生理鹽水組。說(shuō)明，采用NDV、IL-12單獨(dú)治療或NDV+IL-12聯(lián)合治療后，上述指標(biāo)均得到明顯改善，且CD4+/CD8+比值也在升高，說(shuō)明荷瘤小鼠的免疫功能得到加強(qiáng)。 4.各組小鼠瘤組織形態(tài)學(xué)觀察 生理鹽水組小鼠腫瘤細(xì)胞無(wú)明顯壞死，并可見(jiàn)有絲分裂象，NDV

8、組的小鼠腫瘤表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞壞死，壞死的腫瘤細(xì)胞之間及其周圍可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞及單核樣細(xì)胞浸潤(rùn)；IL-12組的小鼠腫瘤組織有明顯壞死，核固縮、細(xì)胞碎片多，但在瘤細(xì)胞之間很少見(jiàn)到淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞。IL-12+NDV組的腫瘤細(xì)胞核固縮，胞質(zhì)出現(xiàn)空泡，核質(zhì)界限不清，腫瘤細(xì)胞之間有淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論：NDV、IL-12單獨(dú)應(yīng)用可以提高機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，IL-12與NDV聯(lián)合應(yīng)用在抗腫瘤免疫反應(yīng)中具有協(xié)同作用，但其協(xié)同抗腫瘤機(jī)