交通性腦積水大鼠模型纖維化發(fā)生機(jī)制及pHGF抗纖維化研究.pdf

1、目的:研究交通性腦積水大鼠模型纖維化發(fā)生機(jī)制以及pHGF抗腦積水纖維化作用。
　　 方法:雄性SD大鼠(250±10g),隨機(jī)分成4組:生理鹽水對(duì)照組,腦積水組,陰性干預(yù)對(duì)照組(生理鹽水干預(yù))和pHGF干預(yù)組,每組15只。腦積水組采用側(cè)腦室注射3％高嶺土混懸液制備交通性腦積水模型;對(duì)照組給予生理鹽水注射;pHGF干預(yù)組:3％高嶺土混懸注射后同時(shí)給予pHGF微滲透泵(pHGF濃度40mg/ml)干預(yù);陰性干預(yù)對(duì)照組:3％高嶺土混懸

2、注射后給予生理鹽水微滲透泵。10天后對(duì)4組分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),第15天行MRI檢測(cè),然后收集腦脊液,處死動(dòng)物,收集腦組織標(biāo)本,行HE、免疫組化、Elisa和RT-PCT檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 1.生理鹽水對(duì)照組和腦積水組比較:
　　 (1)生理鹽水對(duì)照組大鼠腦室未見(jiàn)明顯擴(kuò)大,但腦積水組大鼠除1只外,其它均形成了不同嚴(yán)重程度的交通性腦積水;側(cè)腦室體積分別為:對(duì)照組14.72mm3(中位數(shù)值),范圍:

3、8.778～28.52 mm3,n=14;腦積水組161.4mm3(中位數(shù)值),范圍:24.97～218.1mm3,n=13;p＜0.05,具有顯著性差異。
　　 (2)水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:腦積水組大鼠的潛伏期長(zhǎng)于對(duì)照組,且在第3天具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(腦積水組:39.20±3.249s,n=7;對(duì)照組:26.82±2.576s,n=7。),P＜0.05;在第5天的實(shí)驗(yàn),對(duì)照組大鼠在第1象限內(nèi)的游泳時(shí)間分布(29.132±4.002s

4、,n=7)顯著長(zhǎng)于其它3個(gè)象限,P＜0.05,均有顯著性差異;腦積水組大鼠在第1象限的游泳時(shí)間為19.257±4.205s,n=7,與其它3個(gè)象限的時(shí)間分布無(wú)顯著性差異;
　　 (3)大鼠腦脊液中TGF-β1、HGF和MMP-9含量檢測(cè)結(jié)果如下:生理鹽水對(duì)照組分別為79.96 ng/ml(63.63～112.84 ng/ml),192.48 ng/ml(155.95～248.33 ng/ml),168.59 pg/ml(106.

5、51～212.43pg/ml),腦積水組分別為:172.67ng/ml(110.58～245.73 ng/ml),366.52 ng/ml(279.32～442.34 ng/ml),420.41pg/ml(278.62～485.15 pg/ml),結(jié)果表明腦積水組各含量測(cè)定結(jié)果均顯著高于對(duì)照組,P＜0.05,均具有顯著性差異;
　　 (4)腦積水組大鼠腦組織中TGF-β1、HGF和MMP-9的mRNA高于生理鹽水對(duì)照組,P＜0.

6、05,均具有顯著性差異;
　　 (5)免疫組化檢測(cè)結(jié)果表明,腦積水組大鼠腦組織中TGF-β1、HGF和MMP-9的表達(dá)高于生理鹽水對(duì)照組;病理學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)腦積水組大鼠室周組織結(jié)構(gòu)紊亂和明顯的組織腫脹及膠質(zhì)增生帶,有大量的膠質(zhì)細(xì)胞增生和細(xì)胞水腫、液化,以及胼胝體變薄、變形。
　　 2.陰性干預(yù)對(duì)照組與pHGF干預(yù)組比較:
　　 (1)陰性干預(yù)組大鼠腦室明顯擴(kuò)大,均形成了不同嚴(yán)重程度的交通性腦積水;pHGF干預(yù)組有少部

7、分未形成明顯的腦積水,形成的腦積水相對(duì)較輕。側(cè)腦室體積分別為:陰性干預(yù)組156.1mm3(中位數(shù)值),范圍:36.52～228.1mm3,n=14;pHGF干預(yù)組71.97mm3(中位數(shù)值),范圍:12.34～219.5mm3,n=15,p＜0.05,具有顯著性差異。
　　 (2)水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在各時(shí)間點(diǎn),pHGF干預(yù)組大鼠的潛伏期少于陰性干預(yù)組,但均為達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在第5天實(shí)驗(yàn),pHGF干預(yù)組大鼠在第1象限內(nèi)的游泳時(shí)間

8、分布(24.51±2.912s,n=7)顯著長(zhǎng)于其它3個(gè)象限,P＜0.05,均有顯著性差異;陰性干預(yù)組大鼠在第1象限的游泳時(shí)間為18.09±3.665s,n=7,與其它3個(gè)象限的時(shí)間分布無(wú)顯著性差異;
　　 (3)與陰性干預(yù)對(duì)照組比較,pHGF干預(yù)組大鼠腦脊液中TGF-β1、HGF和MMP-9含量降低,具體如下:陰性干預(yù)對(duì)照組分別為142.79ng/ml(100.58～215.73ng/ml),416.52ng/ml(329.3

9、2～492.34ng/ml),396.19pg/ml(238.61～479.33pg/ml);pHGF干預(yù)組分別為69.61ng/ml(50.62～87.63ng/ml),227.68 ng/ml(148.07～261.80 ng/ml),257.00 pg/ml(202.75～297.74 pg/ml),P＜0.05,均具有顯著性差異;
　　 (4)與陰性干預(yù)對(duì)照組比較,pHGF干預(yù)組大鼠腦組織中TGF-β1的mRNA降低,H

10、GF和MMP-9的mRNA增高,P＜0.05,均具有顯著性差異;
　　 (5)免疫組化檢測(cè)結(jié)果表明,與陰性干預(yù)對(duì)照組比較,pHGF干預(yù)組大鼠腦組織中TGF-β1表達(dá)降低,HGF和MMP-9表達(dá)增高;病理學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)pHGF干預(yù)組較陰性干預(yù)對(duì)照組大鼠室周組織結(jié)構(gòu)紊亂和組織腫脹及膠質(zhì)增生帶相對(duì)較輕,膠質(zhì)細(xì)胞增生和細(xì)胞水腫、液化相對(duì)較輕,說(shuō)明經(jīng)pHGF干預(yù)后,有明顯改善。
　　 結(jié)論:
　　 1.進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的穩(wěn)定、