牙齦卟啉單胞菌脂多糖對單核細(xì)胞活化的影響.pdf

1、目的：
　　近年來越來越多的證據(jù)表明，牙周炎除了造成牙齒的松動脫落，還是心血管疾病的重要危險因素之一。原本定植于牙周袋中的P.g等牙周致病菌及其毒性產(chǎn)物，在牙周炎與CVD的相關(guān)性中扮演著重要的角色。牙周炎時位于牙周袋中的牙周致病菌及其毒性產(chǎn)物如P.g-LPS等可以通過牙周袋軟組織的潰瘍面進(jìn)入全身血液循環(huán)，從而導(dǎo)致菌血癥和內(nèi)毒素血癥等，促進(jìn)循環(huán)血液炎癥因子的分泌，參與動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生發(fā)展。循環(huán)血液中的單核細(xì)胞黏附于血管內(nèi)壁

2、，遷移至內(nèi)膜下并分化為巨噬細(xì)胞后，無限制地吞噬脂質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞，是AS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵步驟。鑒于巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞在AS發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵性作用，研究P.g-LPS能否促進(jìn)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞具有重要意義。本研究以THP-1單核細(xì)胞為研究對象，研究P.g-LPS對單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞的影響;并檢測單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞的過程中炎癥因子的表達(dá)，初步探討P.g-LPS對單核細(xì)胞活化的影響及其機(jī)制，旨在闡明P.g感染在牙周炎與CVD相關(guān)性

3、中的生物學(xué)機(jī)制，為CVD的早期干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。對CVD發(fā)病的影響。
　　方法：
　　THP-1單核細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640完全培養(yǎng)基中。分別用濃度1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和100μg/mlP.g-LPS與THP-1單核細(xì)胞共同孵育3d;10μg/ml P.g-LPS刺激THP-1細(xì)胞懸液共同孵育1d、3d和5d。本實(shí)驗(yàn)采用Typan blue染色檢測P.g-LPS對THP-1單核細(xì)胞增殖率的影響;通過G

4、iemsa染色與吞噬聚苯乙烯熒光微乳球法來觀察P.g-LPS對THP-1單核細(xì)胞形態(tài)與吞噬功能的變化。進(jìn)一步運(yùn)用ELISA檢測細(xì)胞分泌關(guān)鍵炎癥因子TNF-α、IL-1β的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與空白對照組相比，P.g-LPS與THP-1細(xì)胞孵育3d后，顯著抑制其細(xì)胞增殖(P＜0.05)，且隨著時間延長，P.g-LPS對THP-1細(xì)胞增殖的抑制作用逐步增強(qiáng)。 P.g-LPS濃度組中，其抑制作用隨著P.g-LPS濃度增加，

5、對THP-1細(xì)胞增殖抑制作用愈加明顯，呈現(xiàn)正相關(guān)性。
　　2.空白對照組在1d、3d、5d后細(xì)胞均無變化，而10μg/ml P.g-LPS與THP-1細(xì)胞孵育后，在1d后有較少細(xì)胞有形態(tài)上的變化，表現(xiàn)為細(xì)胞偽足的伸長，在3d后細(xì)胞形態(tài)有很明顯的變化，5d后達(dá)到高峰。在P.g-LPS濃度組中，5μg/mlP.g-LPS的刺激條件下，細(xì)胞形態(tài)開始發(fā)生變化。10μg/ml P.g-LPS和100μg/mlP.g-LPS孵育3d后，細(xì)胞形

6、態(tài)均有明顯變化。
　　3.P.g-LPS與THP-1細(xì)胞孵育3d后，胞內(nèi)聚苯乙烯熒光微乳球熒光強(qiáng)度值較空白對照組有明顯增多，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，表明其吞噬功能顯著增強(qiáng)。在P.g-LPS濃度組中，各組中的胞內(nèi)聚苯乙烯熒光微乳球熒光強(qiáng)度值較空白對照組均顯著增強(qiáng)，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且胞內(nèi)熒光顆粒強(qiáng)度值與P.g-LPS濃度呈正相關(guān)性。
　　4.在時間組中，空白對照組中細(xì)胞上清液的IL-1β、TNF-α表達(dá)

7、均較低，PMA陽性對照組的IL-1β、TNF-α表達(dá)均較強(qiáng)。在時間組中，在1d時IL-1β、TNF-α在上清液中的濃度較低，在3d、5d時，P.g-LPS組上清液中IL-1β，TNF-α濃度顯著增加，并與時間呈現(xiàn)正相關(guān)。在P.g-LPS濃度組中，1、5μg/ml P.g-LPS組中，IL-1β，TNF-α蛋白的表達(dá)無明顯變化，在10，100μg/ml濃度組中，蛋白表達(dá)較空白對照組則有顯著上升，且與P.g-LPS的濃度亦呈現(xiàn)正相關(guān)。