皮膚微透析分析方法的構建及外用制劑體內經皮吸收的藥代動力學研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)或局部用藥后，藥物對靶點的藥效作用主要取決于藥物濃度和藥物與受體之間的親和力。其中藥物與受體之間的親和力由藥物的結構和理化性質決定，因此靶組織的藥物濃度是調節(jié)藥物藥效作用的主要手段。皮膚病皮損的治療可以通過系統(tǒng)用藥或局部用藥進行，但針對皮損局部靶組織發(fā)揮藥理作用的兩種途徑的藥物需了解靶皮損內的藥物濃度，一如作用于皮膚病的系統(tǒng)發(fā)病環(huán)節(jié)靶點需要了解血藥濃度一樣。因而皮內藥物濃度不僅是皮損局部藥效作用重要的定量指標，而且是進行皮膚藥

2、代動力學研究的關鍵參數。以往的研究受研究方法和分析設備所限，很難準確測定局部用藥后的皮內藥物濃度。針對上述情況，首先建立小豬體內皮膚微透析(Microdialysis，MD)取樣技術的動物模型，并對MD技術中的影響因素進行考察；與傳統(tǒng)組織勻漿法相比較，評價MD方法用于監(jiān)測皮內藥物濃度的實用性及替代性；同時實時監(jiān)測皮內藥物濃度，對藥效作用作定量分析；并利用皮膚藥動學對制劑間生物等效性的應用進行探索；聯(lián)合體外實驗，觀察藥物的體、內外濃度一效

3、應(毒性)關系，使新藥研究及臨床用藥研究水平提升到一個新的高度。 方法：選用小豬作為微透析模型，用高效液相色譜法(HPIC)測定相關樣品中的待測物濃度，并對HPIC條件進行方法學考核。Ⅰ：以雷公藤內酯醇(T<,0>)為實驗被檢對象，在小豬為體內實施MD取樣方法，建立模型，并考察實驗的影響因素；Ⅱ：以MD方法連續(xù)、動態(tài)測定為基礎，比較局部使用EMIA和P-L軟膏兩種主藥相同、基質成分不同的低共熔局部麻醉制劑后的皮內實時藥物濃度，評

4、價MD技術在臨床前處方篩選和優(yōu)化研究中的應用前景；Ⅲ：通過體外細胞培養(yǎng)細胞病變效應fcytopathic effect，CPE)法體外測定藥物的細胞毒性、MD方法監(jiān)測局部用藥后皮內藥物濃度、組織勻漿法測定局部用藥后皮膚組織藥物濃度、動物連續(xù)局部用藥21天后皮膚組織病理學檢查等步驟，觀察藥物細胞毒作用的體內、體外相關性和區(qū)別；Ⅳ：用體外溶出度實驗分別測定三種生產商不同，但主藥、濃度和劑型都相同的制劑的體外釋放量，再用MD方法監(jiān)測三種制劑的

5、體內藥物經皮吸收量，觀察藥物體外釋放和體內經皮吸收對皮內濃度的影響，進而評價制劑間的生物等效性；Ⅴ：通過觀察制劑的體外藥物釋放、體內經皮吸收和皮膚組織藥物濃度測定，考察MD方法的局限性。 結果： Ⅰ：在微透析方法的眾多影響因素中，探針的灌流速度對實驗結果影響最大，探針的相對回收率與灌流速度之間存在反指數關系；回收率和溫度之間呈線性正相關；在實驗濃度范圍內，探針回收率與周圍溶液濃度無相關性；對實驗樣品雷公藤內酯醇而言，不同

6、的回收率測定方法所得結果之間無顯著性差異； Ⅱ：外用實驗制劑P-L軟膏后兩主成分利多卡因和丙胺卡因的經皮吸收總量(以AUC<,0-6>為評價指標)分別為EMLA的2.32和2.29倍，而皮內藥物達峰濃度(Cmax)分別為EMLA的2.77和2.64倍。外用EMIA后皮內利多卡因和丙胺卡因的濃度分別在2.55h和2.47h達峰，而外用P-L軟膏后1h左右皮內藥物濃度即可以達到上述水平； Ⅲ：體外細胞培養(yǎng)實驗中用CPE法測得

7、化合物HB-13對人角質形成細胞HaCaT株的TC<,50>為24.03μg/mL；用微透析法測定0.5％HB-13凝膠經皮吸收后的皮內藥物濃度的結果表明局部用藥后皮內穩(wěn)態(tài)藥物濃度約為2.3μg/mL；勻漿法測得皮膚組織內的藥物濃度平均為26.32μg/mL。在此前提下，延長給藥時間至21天后觀察給藥部位皮膚的組織學變化的結果表明用藥部位皮膚組織學無病理改變； Ⅳ：濃度和劑型相同的三種阿昔洛韋(acyclovir，ACV)乳膏的

8、體外釋放過程均符合Higuchi動力學方程，累積釋放量Q與時間的平方根t<'1/2>擬合的線性最好，其中ACV乳膏2的體外釋放量最高，為856.96±56.98μg/cm<'2>，ACV乳膏1次之，為833.22±42.76μg/cm<'2>，ACV乳膏3最低，為637.98±71.8g/cm<'2>；上述三種ACV乳膏外用于局部皮膚后，ACV乳膏1的體內經皮吸收量最高，ACV乳膏2和ACV乳膏3的體內經皮吸收量之間無明顯差異。用ACV

9、乳膏2和3的藥代動力學參數進行生物等效性評價，結果表明二者生物等效； Ⅴ：以醋酸曲安奈德(triamcinolone acetonide，TAA)為實驗藥的體外實驗中，微透析探針對TAA的回收率較低，且與傳遞率不相等(平均值分別為13.97％和36.03％)。實驗所用兩種TAA制劑的藥物體外釋放和局部用藥后皮膚組織藥物濃度之間無明顯差異，用MD方法在透析液中不能檢測到TAA的藥物濃度。 結論：在建立MD方法的動物模型完成

10、并對實驗條件進行優(yōu)化以后，可以用MD方法連續(xù)、微創(chuàng)、實時監(jiān)測局部用藥后的皮內藥物濃度變化過程。在此基礎上，可用直接的皮內藥物濃度-時間數據計算外用制劑的局部藥代動力學參數，進而進行制劑間生物等效性評價。MD方法在外用制劑的局部藥代動力學研究、臨床前處方篩選與優(yōu)化、藥物皮膚毒理濃度探索和外用制劑間生物等效性評價方面有良好的應用前景。但是，和所有的實驗方法一樣，MD方法也有方法學本身的局限性。探針對一部分脂溶性高、藥物蛋白結合率高和分子量大