骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈注射移植對(duì)腦缺血大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、缺血性腦血管病是神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病之一，由于腦損傷后腦內(nèi)神經(jīng)元的再生和自身修復(fù)極其困難，所以促進(jìn)缺血性腦損傷后的組織修復(fù)和功能重建，有重要的臨床意義。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和少數(shù)臨床研究表明，細(xì)胞移植可促進(jìn)腦損傷的修復(fù)。由于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)可取自患者自身，體外可培養(yǎng)增殖，具有多向分化潛能，移植后可促進(jìn)多種臟器損傷的修復(fù)，作為移植治療的供體細(xì)胞愈來愈受到重視。研究表明，多途徑的BMSCs移植均可促進(jìn)缺血性腦損傷后的神經(jīng)功能重建，但其機(jī)制

2、尚不十分明確。以往研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦損傷可啟動(dòng)腦內(nèi)自體神經(jīng)干細(xì)胞增殖，并遷移到損傷局部，分化為神經(jīng)元樣和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞。但由于增殖和分化的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量有限，不能有效的發(fā)揮組織修復(fù)作用。本研究建立大鼠前腦缺血/再灌注模型，將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的大鼠BMSCs通過靜脈注射移植到模型動(dòng)物體內(nèi)，觀察BMSCs在宿主腦內(nèi)存活、遷移和分布情況，特別是觀察BMSCs移植對(duì)宿主腦內(nèi)自體神經(jīng)細(xì)胞增殖和分化的影響，探討B(tài)MSCs移植促進(jìn)腦損傷后神經(jīng)功能重建的可能

3、機(jī)制，為將來臨床實(shí)際應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 體外培養(yǎng)和擴(kuò)增成年雄性大鼠BMSCs，以“四管阻斷法”制作大鼠前腦缺血/再灌流模型。分為造模后3d、5d和7d組，通過尾靜脈注射Hoechst33342標(biāo)記的BMSCs(2×10<'6>/lml)：另按相同時(shí)間點(diǎn)設(shè)立對(duì)照組，通過尾靜脈注射載體溶液。造模后2周，予大鼠腹膜腔內(nèi)注射BrdU，1次/日×2周，以標(biāo)記腦內(nèi)增殖細(xì)胞。于造模后3周采用Morris水迷宮觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶功能

4、。于造模后4周處死大鼠，取腦切片，于熒光顯微鏡下觀察BMSCs在腦內(nèi)存活及分布情況；通過HE染色觀察大鼠海馬病理損傷情況；通過BrdU/GFAP、BrdU/MAP2和BrdU/Hoechst33342免疫熒光雙標(biāo)染色，觀察大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的增殖及分化情況。 結(jié)果 1．BMSCs移植大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期、穿環(huán)次數(shù)和原象限時(shí)間與載體溶液注射對(duì)照組相比有顯著差異(p<0.05)，逃避潛伏期顯著短于對(duì)照組，穿環(huán)次

5、數(shù)和原象限時(shí)間顯著高于對(duì)照組。 2．靜脈注射移植的BMSC能夠遷移至宿主腦內(nèi)并存活，主要分布在缺血選擇性易損的海馬結(jié)構(gòu)。 3．BMSCs移植大鼠腦組織切片HE染色發(fā)現(xiàn)，海馬CA1區(qū)存活錐體細(xì)胞數(shù)目顯著多于載體溶液注射對(duì)照組。 4．BMSCs移植大鼠腦內(nèi)海馬結(jié)構(gòu)BrdU陽性細(xì)胞數(shù)目顯著多于載體溶液注射對(duì)照組，且絕大多數(shù)為自體增殖細(xì)胞；BrdU/MAP-2雙標(biāo)陽性細(xì)胞占BrdU陽性細(xì)胞的比例顯著高于載體溶液注射對(duì)照組