豬苓多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、目的：通過研究豬苓多糖(PUPS)對(duì)BALB/C小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性、能量代謝水平的影響；檢測(cè)不同濃度PUPS作用于巨噬細(xì)胞后，腫瘤壞死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)以及白細(xì)胞介素(IL-6)分泌量的改變；觀察巨噬細(xì)胞與固定濃度PUPS共同培養(yǎng)不同的時(shí)間后，對(duì)腫瘤壞死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)以及白細(xì)胞介素(IL-6)分泌量的影響，進(jìn)而探討PUPS在機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)以及抗腫瘤方面的作用及可能機(jī)理，為臨床用藥及進(jìn)一

2、步開發(fā)提供依據(jù)。
　　 方法：以細(xì)胞試驗(yàn)為主。對(duì)BALB/C雄性小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)行了分離與純化，設(shè)置了RPMI-1640空白對(duì)照組、LPS陽(yáng)性對(duì)照組與PUPS給藥組；分別采用中性紅吞噬法測(cè)定了巨噬細(xì)胞的吞噬功能，MTT比色法及細(xì)胞因子的生物學(xué)檢測(cè)法(L929細(xì)胞株法)測(cè)定了巨噬細(xì)胞的能量代謝水平以及TNF-α的分泌量，免疫學(xué)的酶ELISA法測(cè)定了IL-6的分泌量，Griess反應(yīng)法測(cè)定了NO的分泌量。觀測(cè)不同濃度PUPS作用

3、下，巨噬細(xì)胞的吞噬活性、TNF-α、IL-6及NO分泌量的變化；以及相同濃度的PUPS作用下，不同的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬活性、TNF-α、IL-6及NO分泌量的影響。
　　 結(jié)果：⑴吞噬功能與空白對(duì)照組相比，PUPS能明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，P＜0.05；低濃度(＜200 mg/L)時(shí)，巨噬細(xì)胞的吞噬活性會(huì)隨著PUPS濃度的增加而顯著增加(P＜0.05)；高濃度(≥200 mg/L)時(shí)，吞噬活性的增加速度變緩，當(dāng)PUPS

4、為400 mg/L時(shí)，吞噬活性達(dá)到最大。⑵能量代謝水平與空白對(duì)照組相比，PUPS能明顯增加巨噬細(xì)胞的能量代謝水平，P＜0.05；低濃度(＜200 mg/L)時(shí)，巨噬細(xì)胞的能量代謝水平會(huì)隨著PUPS濃度的增加而顯著增加，P＜0.05；濃度(≥200 mg/L)時(shí)，能量代謝水平的增加趨勢(shì)減緩，當(dāng)PUPS為400mg/L時(shí)，能量代謝水平達(dá)到最大。⑶TNF-α的分泌量當(dāng)PUPS濃度達(dá)到200mg/L時(shí)，對(duì)巨噬細(xì)胞分泌的促進(jìn)作用最明顯，P＜0.0

5、5，之后TNF-α的分泌量會(huì)隨著PUPS濃度的增加而緩慢增加并逐漸趨于穩(wěn)定；當(dāng)PUPS濃度為100mg/L、培養(yǎng)6h時(shí)，TNF-α分泌量增加顯著，培養(yǎng)12h時(shí)，巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌量會(huì)達(dá)到最大值，之后隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加不明顯。⑷NO的分泌量不同濃度的PUPS對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的NO分泌量均有不同程度的刺激作用，其中又以高濃度(400mg/L)時(shí)的促進(jìn)作用明顯；當(dāng)PUPS固定濃度為100mg/L時(shí)，巨噬細(xì)胞的NO分泌量會(huì)隨著巨噬

6、細(xì)胞與PUPS培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，在48h時(shí)達(dá)到最高峰。⑸IL-6的分泌量PUPS在200mg/L時(shí)，對(duì)巨噬細(xì)胞分泌IL-6的促進(jìn)作用最明顯，P＜0.05，之后IL-6分泌量會(huì)隨著PUPS濃度的增加而緩慢增加并逐漸趨于穩(wěn)定；當(dāng)PUPS濃度為100mg/L、培養(yǎng)24h時(shí)，IL-6的分泌量達(dá)到最大值，之后隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加不明顯。
　　 結(jié)論：①PUPS可以產(chǎn)生類似于LPS對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的刺激作用。PUPS能刺激巨噬

7、細(xì)胞進(jìn)一步的分化成熟而成為活化巨噬細(xì)胞，從而增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能以及能量代謝水平。②PUPS能增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO以及細(xì)胞因子TNF-α與IL-6。③延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間可以顯著增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO以及細(xì)胞因子TNF-α與IL-6。TNF-α的分泌量是在培養(yǎng)6h后得到了明顯增加，而NO以及IL-6的分泌量則是在培養(yǎng)了24h后得到顯著增加。④本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，PUPS是通過增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能、能量代謝水平和促進(jìn)