前列腺癌特異性分子探針的構建及其活體MR成像實驗研究.pdf

1、目的：
　　1.培養(yǎng)人前列腺癌細胞系，建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型，探討PSCA在其中的表達及其意義；
　　2.應用納米金磁微粒標記抗人PSCA單抗7F5，構建前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag，檢測其與前列腺癌細胞結合的特異性；
　　3.探討7F5@GoldMag用于體外、體內MR顯像的可行性及其在PCa特異性診斷中的價值和意義。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)人前列腺癌細胞系LNCaP、PC-3和人

2、肝癌細胞系SMMC-7721，建立荷瘤裸鼠模型，利用免疫組織化學，間接免疫熒光，免疫細胞化學，流式細胞術和western blotting等方法，檢測PSCA在體外培養(yǎng)的前列腺癌細胞系及荷瘤裸鼠腫瘤中的表達。
　　2.將金磁微粒作為MR對比劑標記7F5，應用非共價鍵偶聯(lián)方法構建前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag，通過激光共聚焦顯微鏡觀察，流式細胞術，透射電鏡觀察等方法，檢測探針與前列腺癌細胞結合的特異性。
　　

3、3.利用臨床應用的3.0T磁共振掃描儀建立MR掃描序列，觀察不同濃度的金磁微粒MR成像情況，探討MR可分辨的最低濃度；研究探針用于特異性體外細胞成像的可行性；對荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈注射7F5@GoldMag，分別在注射前、注射后6h、12h和24h行MR掃描，觀察其對腫瘤T2WI信號的影響，探討其用于體內腫瘤MR成像的可行性。
　　結果：
　　1.人前列腺癌細胞系LNCaP、PC-3及人肝癌細胞系SMMC-7721呈單層貼壁生長

4、；LNCaP細胞成瘤率12.5％(1/8)；PC-3和SMMC-7721細胞成瘤率100％(8/8)；免疫細胞化學染色、間接免疫熒光、Western-blot及流式細胞術檢測結果證實LNCaP、PC-3細胞表達PSCA；SMMC-7721細胞不表達PSCA；荷瘤裸鼠組織的免疫組織化學染色證實了類似結果。
　　2.成功構建了前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag；流式細胞術檢測結果7F5@GoldMag與LNCaP及PC-

5、3細胞結合率分別為85.2％和92.1％，而與SMMC-7721細胞結合率為4.2％，無關抗體@GoldMag組三種細胞均為陰性；激光共聚焦顯微鏡觀察見LNCaP和PC-3細胞與7F5@GoldMag有特異性結合，紅色熒光位于細胞膜，SMMC-7721細胞的胞膜未見紅色熒光，無關抗體組各細胞系均為陰性；透射電鏡觀察LNCaP及PC-3靠近細胞膜可見多個直徑約50nm的團塊狀致密電子密度顆粒聚集，SMMC-7721細胞表面未見致密電子密度

6、顆粒，無關抗體@GoldMag組各細胞系均僅個別視野見少量致密電子密度顆粒，且距離細胞膜較遠。
　　3.GoldMagTM-CS稀釋至1:640與1％瓊脂糖凝膠相比，T2WI序列信號強度差異有統(tǒng)計學意義；利用7F5@GoldMag標記不同細胞系行MR掃描結果提示，7F5@GoldMag可顯著降低LNCaP和PC-3細胞T2WI信號，而對SMMC-7721MR信號無顯著影響。非特異抗體偶聯(lián)的GoldMag對三種細胞MR信號均無顯著影

7、響。
　　4.荷瘤裸鼠MR顯像結果，PC-3荷瘤裸鼠注射7F5@GoldMag6h、12h和24h后腫瘤組織T2WI信號強度較平掃顯著降低（ANOVA，F(xiàn)=43.675，p=0.000）；注射探針后12h較6h信號強度有進一步降低（p=0.001）；注射后12h和24h腫瘤信號強度差異無統(tǒng)計學意義（p=0.145）。而SMMC-7721+7F5@GoldMag、PC-3+無關抗體@GoldMag和SMMC-7721+無關抗體@Go