不明原因復發(fā)性流產(chǎn)夫婦WNT6基因突變位點篩查及KIR2DL4基因多態(tài)性研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 WNT6基因在不明原因復發(fā)性流產(chǎn)夫婦基因突變位點的篩查
　　研究目的:通過對中國漢族100對不明原因復發(fā)性流產(chǎn)夫婦WNT6基因突變位點的篩查，探討不明原因復發(fā)性流產(chǎn)是否與WNT6基因突變相關。
　　研究方法:利用PCR擴增及Sanger法基因測序技術，對中國漢族100對不明原因復發(fā)性流產(chǎn)夫婦和中國漢族100對正常生育夫婦行WNT6基因4個外顯子的基因序列及相關側(cè)翼序列檢測

2、。與Ensembl提供的正常序列比對，分析WNT6基因編碼序列是否存在異常堿基改變、插入或缺失。若發(fā)現(xiàn)新的突變位點，則擴大對照組樣本量，進一步驗證突變位點是否只存在于病例組。后續(xù)應用多個在線軟件預測突變位點對基因功能的影響。
　　研究結果:測序結果顯示病例組4名女性患者WNT6基因各自篩查出4個新發(fā)突變位點:1個位于內(nèi)含子1與外顯子1交界序列，屬無義突變;2個位于外顯子3編碼序列，一個錯義突變，一個同義突變;1個位于3'UTR區(qū)域

3、，突變意義不詳。病例組男性患者及對照組夫婦雙方均未發(fā)現(xiàn)相同突變位點。位于該基因外顯子3的錯義突變?yōu)閏.443T＞G，該突變位于WNT1功能域，突變導致編碼氨基酸改變，且兩種氨基酸的化學結構和性質(zhì)均不同，進一步的蛋白質(zhì)模型預測表明其蛋白質(zhì)的結構受到影響。擴大對照組女方樣本量1倍，仍未發(fā)現(xiàn)相同的新發(fā)錯義突變位點。所有樣本均未檢測到已知的SNPs位點。
　　結論:不明原因復發(fā)性流產(chǎn)女性患者WNT6基因錯義突變可能是導致復發(fā)性流產(chǎn)的原因之

4、一，為復發(fā)性流產(chǎn)的病因?qū)W研究補充新內(nèi)容，在國際上未見相同報道，仍需要進一步的功能實驗驗證。
　　第二部分 KIR2DL4基因多態(tài)性與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)的相關性研究
　　研究目的:本研究對96對中國漢族不明原因復發(fā)性流產(chǎn)患者夫婦進行KIR2DL4基因多態(tài)性分析，探討KIR2DL4基因多態(tài)性與不明原因復發(fā)性流產(chǎn)相關性。
　　研究方法:以96對不明原因復發(fā)性流產(chǎn)夫婦和94對正常生育夫婦為研究對象，對KIR2DL4基因外顯子3

5、、外顯子5、外顯子7、外顯子8和外顯子9基因序列行PCR-SBT擴增測序，即采用兩對引物，外顯子3和5用一對引物，外顯子7、8和9用一對引物，擴增產(chǎn)物經(jīng)兩步純化后，用四對引物分別從上、下游測序，測序方法采用直接基因測序技術。分析基因在總?cè)巳褐械任换蝾l率的發(fā)生率，以及外顯子7的9A/10A多態(tài)位點等位基因頻率在病例組和對照組的差異。
　　研究結果:測序結果分析顯示該研究中國漢族人群的基因型分布符合文獻報道的中國人群的基因型分布。而

6、位于跨膜區(qū)域第7外顯子10A/9A多態(tài)位點:基因型頻率比較發(fā)現(xiàn)，本研究人群中總的基因型頻率的比較無統(tǒng)計學差異;夫婦一方或夫婦雙方的基因型頻率在兩組之間均無明顯差異。等位基因型頻率比較發(fā)現(xiàn)，該多態(tài)位點等位基因型頻率在本研究人群中與中國漢族人群報道的等位基因型頻率比較無統(tǒng)計學差異;兩組中男方或夫婦雙方的等位基因基因型頻率無明顯統(tǒng)計學差異。女方9A等位基因型頻率(19.3％)高于對照組(14.9％)，9A單倍體型在病例組有增高的趨勢，但經(jīng)過統(tǒng)