風心病合并房顫患者心肌組織microRNA-661表達差異分析及其靶基因預測研究.pdf

1、目的：研究風心病合并房顫患者心肌組織 microRNA-661的表達差異并進行驗證，分析其下游可能調控與房顫有關的靶基因，旨在探討房顫發(fā)生機制中miRNAs的作用，為進一步研究奠定基礎，并尋求安全有效治療房顫的藥物提供新靶點。
　　方法：⑴經知情同意，采集風心病瓣膜置換術患者右心耳心肌組織約250mg入組研究，分為風心病合并房顫組與風心病無房顫組共4例；⑵以Affymetrix miRNA芯片對風心病合并房顫與風心病無房顫患者的心

2、肌組織進行miRNAs表達譜檢測，應用RMA數據分析，FC法初步篩選出其差異表達miRNAs；⑶采用RT-qPCR的方法對篩選出的有意義的miRNAs（hsa-miRNA-661和hsa-miRNA-4800-3p）進行驗證研究，應用2-Ct方法分析兩組心肌組織差異表達的miRNAs；⑷運用生物信息學軟件預測miRNAs靶基因、文獻檢索及GO和KEGG的分析，在miRNA水平上探討風心病合并房顫發(fā)生與維持的可能分子機制。
　　結果

3、：①風心病合并房顫組與風心病無房顫組相比，其心肌組織中22條有差異miRNAs的相對表達量，其中6條miRNAs表達上調，16條miRNAs表達下調；②驗證研究結果表明與風心病無房顫組比較，風心病有房顫組hsa-miR-661相對表達顯著下調（P＜0.01）,而hsa-miR-4800-3p相對表達沒有統計學意義變化（P＝0.757）；③預測hsa-miR-661共同靶基因44個，42個靶基因尚未見與房顫有關的NCBI PubMed相關

4、報道；④經GO和KEGG數據分析，確定hsa-miR-661靶基因分別參與心肌組織發(fā)育、細胞增殖、生長調節(jié)功能，作用于肌節(jié)、肌原纖維、收縮纖維，與附著和連接、轉錄因子活性調控、炎癥關聯等生物學過程，分別集中在Wnt、CYTOSKELETON、ADHERENS、JUNCTION、ENDOCYTOSIS、TGF-β和MAPK等信號通路上，其中以Wnt通路顯著富集指數最高。
　　結論：⑴風心病合并房顫患者心肌組織miRNA基因表達譜存在

5、多種差異，房顫形成可能是多種miRNA通過其介導的下游靶基因共同調控的結果；⑵驗證研究顯示在風濕性瓣膜病合并房顫組織中hsa-miR-661顯著下調，hsa-miR-661的表達量與房顫相關；⑶預測獲得hsa-miR-661靶基因44個，其中42個靶基因尚未見與房顫有關的NCBI PubMed相關報道；⑷通過生物功能和信號通路分析顯示，hsa-miR-661對AF的調控顯著體現在細胞外基質合成、代謝及 Wnt信號通路上；⑸hsa-miR