Sox9在大鼠骨關節(jié)炎軟骨中的表達及Wnt-β-catenin信號通路干預對其的影響.pdf

1、目的：
　　探討實驗性大鼠骨關節(jié)炎模型的有效性；探討軟骨細胞內(nèi)Sox9基因在骨關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）進程中表達的特點，以及受Wnt/β-catenin信號通路（經(jīng)典Wnt信號轉(zhuǎn)導通路）干預后的影響。
　　方法：
　　105只SD大鼠隨機分為手術組（實驗組）、阻斷Wnt/β-catenin信號通路組（干預組）和假手術組（對照組），每組各35只。
　　（1）實驗性大鼠骨關節(jié)炎（OA）造模，手術組

2、（實驗組）：前交叉韌帶橫斷和內(nèi)側(cè)半月板切除；對照組：打開關節(jié)腔，不切斷交叉韌帶和切除半月板；干預組：造模術后第二天始行降鈣素15 IU/kg隔日皮下注射,實驗組和對照組注射等量的生理鹽水。在造模1w、2w、4w、6w、8w、12w處死大鼠。膝關節(jié)標本肉眼大體觀察，取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨作為組織標本，HE染色、甲苯胺藍染色。以 Mankin評分為標準，對OA的病程進行分期。
　?。?）取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨標本。各個時間點的標本經(jīng)處理后，液氮保

3、存，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測Sox9、II型膠原、聚蛋白多糖（Aggrecan）的蛋白含量，實時熒光定量PCR檢測Sox9、II型膠原、聚蛋白多糖（Aggrecan）基因表達的變化，分析OA早、中、晚期上述細胞因子的變化特點。通過降鈣素（CT）阻斷Wnt/β-catenin通路后Sox9上調(diào)對各組大鼠標本軟骨合成因子的影響，分析阻斷Wnt/β-catenin通路后Sox9的變化對骨關節(jié)炎軟骨的作用。
　　結果：
　　

4、（1）實驗組：造模1w肉眼觀察沒有變化，組織切片HE染色見不規(guī)則裂隙，甲苯胺藍染色深染；2w關節(jié)軟骨失去光澤，色暗， HE染色軟骨細胞數(shù)量輕度增生，甲苯胺藍深染；4w見軟骨破壞，細胞數(shù)量增多；6w軟骨潰瘍破壞明顯，骨贅增生，軟骨層變薄，細胞排列紊亂，甲苯胺藍染色變淺；8w軟骨缺損，骨贅增生明顯，有軟骨細胞壞死，甲苯胺藍染色大部分層次明顯變淺；12w可見軟骨下骨外露，細胞數(shù)量明顯減少，甲苯胺藍失染。干預組：病理改變時期延后2w。對照組大體

5、和組織切片接近正常。
　?。?）ELISA測定和Realtime PCR
　　Sox9:在實驗組，Sox9含量在4w前上調(diào)，有差異（P<0.05）；在6-12w，仍表現(xiàn)為上調(diào)，但沒有差異（p>0.05）。在干預組，4w以前，Sox9上調(diào)趨勢明顯（P<0.05）；在6-12w，其表達仍表現(xiàn)為上調(diào)，但沒有差異（p>0.05）。
　　II型膠原和聚蛋白多糖（Aggrecan）：在實驗組，該兩種蛋白表達呈下調(diào)趨勢，且差異顯著（

6、p<0.01）；在干預組，該兩種蛋白表達呈上調(diào)趨勢，有差異（p<0.05）。干預組和實驗組相比，4w后呈上調(diào)趨勢（p<0.05）、其表達量在4w后也顯著增多（p<0.01）。
　　結論：
　?。?）通過本實驗研究我們發(fā)現(xiàn)手術切斷前交叉韌帶及內(nèi)側(cè)半月板可以有效的制作大鼠骨關節(jié)炎模型。而且手術創(chuàng)傷小，所需時間短，能反映骨關節(jié)炎由輕到重的整個病變過程。
　?。?）OA病程中，Sox9的表達呈上調(diào)趨勢，說明軟骨細胞一直在對抗自