六味地黃湯對甲亢型腎陰虛大鼠肝線粒體蛋白質組影響的研究.pdf

1、目的：本實驗通過蛋白質組學中雙向電泳技術和質譜技術平臺，應用圖象分析系統(tǒng)，分離和分析正常對照組大鼠、甲亢型腎陰虛模型組大鼠、以及六味地黃湯治療組大鼠肝線粒體蛋白質組表達量和/或質的變化信息，從能量代謝角度來研究腎陰虛證在肝線粒體蛋白質組學變化，了解腎陰虛證的發(fā)病機理，并從蛋白質組水平探討六味地黃湯的作用機理。
　　方法：18只Wistar雄性大鼠隨機分成3組：正常對照組、甲亢型腎陰虛模型組以及六味地黃湯治療組。正常對照組大鼠連續(xù)生

2、理鹽水灌胃21天；甲亢型腎陰虛模型組大鼠連續(xù)甲狀腺片藥液灌胃21天；六味地黃湯治療組大鼠連續(xù)甲狀腺素片藥液灌胃21天，于第8天起用六味地黃湯治療，共14天。動物處死后以差速離心法分離肝線粒體，并提取蛋白質。每組6個樣品等量混合進行蛋白質雙向電泳分離，經(jīng)圖象掃描、軟件分析得到差異蛋白質。挖取感興趣的蛋白質，經(jīng)膠內酶解后，用質譜分析獲得肽指紋圖譜，所得結果與蛋白質組文庫進行比對。
　　結果：對照組3次凝膠的平均蛋白質點數(shù)為521個，模

3、型組3次凝膠的平均蛋白質點數(shù)為587個，治療組3次凝膠的平均蛋白質點數(shù)為612個。選取所有膠上相互匹配且分辨清楚的蛋白質點進行統(tǒng)計學分析，篩選出具有明顯差異（Varition>2.0，P<0.05）的蛋白質點40個。經(jīng)過膠內酶切后用基質輔助激光電離飛行時間質譜（MALDI TOF MS+MS/MS）進行檢測：模型組與對照組比較，12個蛋白質點被確定，造模組大鼠肝線粒體中的氨甲酰磷酸合酶Ⅰ、轉甲狀腺素蛋白D鏈表達降低，短鏈-3-羥酰輔酶A

4、脫氫酶、線粒體分裂蛋白1、谷胱甘肽硫轉移酶Mu1、核有絲分裂器蛋白1、凋亡抑制蛋白3、熱休克蛋白60、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶1β亞單位、核轉錄因子-kB2、BNIP1 protein、鳥氨酸轉氨酶表達均比正常組升高；治療組與模型組比較，11個蛋白質點被確定，經(jīng)中藥治療后，Major urinary protein precursor、Peroxiredoxin-6、內質網(wǎng)蛋白29前體、大鼠轉甲狀腺素蛋白D鏈表達升高，78 kD

5、a葡萄糖調節(jié)蛋白前體、谷胱甘肽硫轉移酶Mu1、熱休克蛋白60、肽基脯氨酰順反式異構酶、核轉錄因子-kB2、H＋-轉運ATP合酶、BNIP1 protein表達均降低。
　　結論：腎陰虛動物能量代謝活躍，線粒體內物質分解氧化作用加強，檸檬酸循環(huán)和氧化磷酸化加速。腎陰虛動物存在以NF-kB過量表達活化為核心的免疫炎性細胞因子紊亂和凋亡抑制狀態(tài)。這些發(fā)現(xiàn)提示腎陰虛證的發(fā)病機理和能量代謝亢進、炎性細胞因子紊亂、凋亡抑制狀態(tài)有相關性。六味地