不同齒科合金對L929細胞的毒性及凋亡相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、目的: 齒科合金作為口腔修復的常用材料，在口腔內(nèi)行使功能時，會發(fā)生各種形式的腐蝕。細胞毒性一直是醫(yī)用金屬材料使用中的重要問題之一。隨著分子生物學的迅速發(fā)展，生物材料生物相容性的研究手段逐漸多樣化，其評價已從整體、細胞水平進入了分子水平。本研究應用MTT法和RT-PCR法比較了在細胞水平和分子水平上5種齒科合金浸提液對小鼠L929細胞的影響，為從分子水平上評價材料的生物相容性提供實驗依據(jù)。 材料與方法: 一、細胞培

2、養(yǎng) L929細胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640細胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。 二、本實驗室L929細胞生長代謝曲線將對數(shù)生長期的L929細胞按1～10×104個/ml制成10種不同濃度的細胞懸液，72小時后加入MTT液繼續(xù)培養(yǎng)4小時后加入DMSO，在波長為490nm的條件下測其光密度值(OD值)，計算各濃度組均值制圖。 三、MTT實驗根據(jù)上述曲線確定接種細胞懸液的濃度。以5種金屬浸提

3、液及陰性對照培養(yǎng)L929細胞48小時后測其OD值，計算細胞增殖率P。 四、RT-PCR實驗將5種金屬合金浸提液及陰性對照與L929細胞培養(yǎng)48小時，用RT-PCR方法檢測細胞caspase-3、caspase-8和caspase-9的mRNA表達。 結(jié)果: 一、細胞生長曲線結(jié)果 當接種細胞量<4000個/孔時各組的差異不明顯。當細胞量≥7000個/孔時，OD值隨著接種細胞量的增加反而降低。最佳細胞狀態(tài)為5

4、000-7000個/孔。 二、MTT實驗評價細胞毒性 5種合金浸提液在MTT比色法結(jié)果中，培養(yǎng)48h后除銅浸提液組的細胞毒性為4級外，其它各浸提液組均為0級。 三、5種合金浸提液對L929細胞caspase-3、caspase-8和caspase-9mRNA表達的影響 5種合金浸提液及陰性對照培養(yǎng)的L929細胞的caspase-8mRNA無明顯差異caspase-3和caspase-9mRNA差異顯著，由

5、低到高依次為銅合金組<陰性對照組<金合金組<鈷鉻合金組<銀鈀合金組<鎳鉻合金組。 結(jié)論: 1、在分子水平上研究生物材料對L929細胞的影響較在細胞水平上更靈敏。 2、5種齒科合金中的金屬離子都會不同程度地誘導細胞凋亡，且其凋亡途徑為線粒體途徑。 3、L929細胞經(jīng)5種齒科合金浸提液培養(yǎng)48h后的caspase-3和caspase-9mRNA水平由低到高依次為：銅合金<陰性對照和金合金<鈷鉻合金<銀鈀合金<