MiR-181b-ERK-P53在冬凌草甲素對胰腺癌細胞凋亡中的作用.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文論文題目：叢iB：呈壘呈墜堡B鯉量圣查釜凌堇里塞撾腿速疸答辯委員會主席：鱟邀≤逝江太堂險屆箍二醫(yī)院≥答辯委員會成員：塞叢筮室≤漁趔醫(yī)堂院附屬箜三醫(yī)院≥韭住≤濕趔醫(yī)堂陵附屬箜三醫(yī)院≥溫州醫(yī)學院碩士學位論文MiR181b／ERK／P53在冬凌草甲素對胰腺癌細胞凋亡中的作用中文摘要目的：l、觀察不同濃度冬凌草甲素在體外對胰腺癌細胞株PANC一1細胞增殖、凋亡的影響以及對miRt81b在冬凌草甲素誘導胰腺癌細胞凋亡中功能的

2、評價；2、在體內，通過不同質量濃度的藥物對裸鼠原位移植瘤模型的作用，對其作用機制進一步研究和論證。方法：l、在體外，培養(yǎng)人胰腺癌PANC1細胞。CCK8用于檢測冬凌草甲素的抗腫瘤細胞增殖。AnnexinVFITC／PI雙染流式細胞術用于細胞凋亡的檢測；其中MAPK抑制劑將用于對其機制的初步研究。細胞凋亡形態(tài)學的改變用倒置顯微鏡和熒光顯微鏡分析。細胞轉染技術用于評價miR一181b的功能評價及相關指標的測定。2、在體內，建立胰腺癌裸鼠原位

3、移植瘤模型，分為四組：生理鹽水對照組(N組)、8mg／Kg冬凌草甲素組(08組)、16mg／Kg冬凌草甲素組(016組)和24mg／Kg冬凌草甲素組(024組)，各組通過腹腔注射給藥，每天一次，共持續(xù)給藥四周。藥物治療l周后處死裸鼠，檢測實驗前后裸鼠體重變化。TUNEL法檢測移植瘤組織的細胞凋亡情況；WB和熒光定量PCR檢測Caspase8、Bax、pp38、p38、INK、pJNK、ERKI／2、pERK1／2、pp53等指標的表達。

4、結果：1、冬凌草甲素在體外可誘導人胰腺癌細胞系PANC1的增殖抑制和凋亡。倒置顯微鏡可見細胞呈核皺縮、核裂解等凋亡征象；熒光顯微鏡可見細胞呈現(xiàn)早期和晚期凋亡之不同的改變。冬凌草甲素抑制PANC1細胞的增殖，且隨著濃度的增高、時間的延長，抑制越為明顯，且其50％抑制濃度(IC50)為169mol／l，與對照組相比各實驗組統(tǒng)計結果有統(tǒng)計學意義(P005)。流式細胞術研究證實：冬凌草甲素可促進胰腺癌細胞的凋亡，且具有藥物濃度依賴性；MEKl／