細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)合材料修復(fù)尿道缺損的實驗研究.pdf

1、目的：本研究利用組織工程原理和干細(xì)胞技術(shù)，構(gòu)建尿道組織，修復(fù)兔尿道全段缺損。對細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)材料在體外的復(fù)合方法，復(fù)合細(xì)胞材料修復(fù)尿道缺損的過程及其與單純細(xì)胞外基質(zhì)材料修復(fù)效果的差異，種子細(xì)胞在植入機(jī)體后的命運(yùn)轉(zhuǎn)歸進(jìn)行初步探討，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。同時初步探討利用BMSC-FG作為填充材料(Bulking Agent，BA)治療壓力性尿失禁及膀胱輸尿管返流的可行性。 方法：①選擇兔膀胱尿路上皮細(xì)胞、兔膀胱平滑肌細(xì)胞及兔骨髓間

2、充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)作為種子細(xì)胞，采用相應(yīng)的培養(yǎng)及純化策略，獲取滿足實驗要求的種子細(xì)胞。并對兩種可行的上皮細(xì)胞培養(yǎng)方案進(jìn)行對比，選擇更好的培養(yǎng)方法。利用細(xì)胞計數(shù)及MTT法對三種細(xì)胞在體外的生長增殖情況進(jìn)行研究。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對兔BMSC進(jìn)行綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染，試圖獲得穩(wěn)定表達(dá)。②選擇兩種常用的泌尿外科組織工程材料——同種膀胱細(xì)胞外基質(zhì)BECM和豬小腸粘膜下層SIS分別與兔BMSC及兔尿路上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)，在體外構(gòu)建尿道工程組織，

3、對細(xì)胞在材料表面的分布及增殖情況進(jìn)行研究。③分別利用復(fù)合有兔BMSC及尿路上皮細(xì)胞的兔膀胱細(xì)胞外基質(zhì)對長度為1.5—2.0cm的雄性兔懸垂部全長尿道缺損進(jìn)行原位修復(fù)實驗，并與單純BECM修復(fù)進(jìn)行對比，32只動物分為4組，分別為單純BECM修復(fù)組(組1)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)復(fù)合：BECM修復(fù)組(組2)，尿路上皮復(fù)合BECM。組(組3)，假手術(shù)組(組4)。分別于1w、2w、4w及12w取材通過大體觀、組織學(xué)方法、尿道膀胱造影觀察組

4、織再生與修復(fù)情況。組2、組3于修復(fù)前對種子細(xì)胞進(jìn)行BrdU標(biāo)記，取材后以免疫組化尋找BrdU標(biāo)記細(xì)胞。④6 R新西蘭兔進(jìn)行自體對照實驗，，每只動物均在膀胱頸口3點(diǎn)及9點(diǎn)鐘部位注射兩點(diǎn)，分別為實驗點(diǎn)(采用纖維蛋白膠(FG)為載體復(fù)合BrdU標(biāo)記的兔BMSC)與對照點(diǎn)(同法注射的單純纖維蛋白膠)。分別于術(shù)后2w、4w及8w取材行組織學(xué)，免疫組化檢查。 結(jié)論：膀胱上皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞、BMSC均可快速培養(yǎng)，純化擴(kuò)增并作為組織工程的種子