牽張應變誘導HPDLCs凋亡信號通路的實驗研究.pdf

1、目的:牙齒受力時,外力通過牙周膜傳遞并分散至頜骨,從而引發(fā)牙周組織對外力作用的生理應答。牙周膜細胞對機械刺激的反應在牙周改建中具有非常重要的作用。前期研究表明,牽張力可以引起牙周膜細胞早期凋亡,但是具體機制尚不清楚,因此本研究力圖探討牽張力引起牙周膜細胞凋亡的信號通路,以期能夠為口腔修復和正畸合理選擇基牙,牙齒合理施力以及牙周病防治等方面提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：通過原代和傳代培養(yǎng)獲得生長穩(wěn)定的實驗用人牙周膜細胞,然后利

2、用動態(tài)機械應變細胞加載裝置對人牙周膜細胞加載1％、10％和20％的動態(tài)牽張應變6h、12h、24h和48h,通過流式細胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對經(jīng)過TUNEL染色的細胞進行晚期凋亡檢測,同時利用酶標儀檢測Caspase-3活性以及添加Caspase-8和Caspase-9阻斷劑后Caspase-3活性,并采用基因芯片檢測細胞在不同機械應變下凋亡相關基因的表達差異。
　　 結果：
　　 1、人牙周膜細胞在體外培養(yǎng)4～8代

3、的性狀穩(wěn)定,適宜于進行力學加載實驗；
　　 2、細胞加載后,呈現(xiàn)柵欄狀相互平行排列的趨勢,細胞排列方向垂直于牽張力方向,且隨著加載應變和加載時間的增加,細胞相互平行的趨勢愈明顯；
　　 3、通過流式細胞儀對TUNEL染色的細胞檢測發(fā)現(xiàn),各應變組細胞的晚期調(diào)亡率在加載24h時達到該應變組的峰值,且具有一定的時間和應變值依賴性,但隨著加載時間的延長,48h時各應變組細胞的晚期調(diào)亡率均下降；
　　 4、通過酶標儀檢測C

4、aspase-3蛋白酶活性發(fā)現(xiàn),Caspase-3活性具有一定的時間和應變值依賴性,各應變組細胞的Caspase-3活性在加載24h時達到該應變組的峰值,和晚期凋亡率變化趨勢一致；
　　 5、通過阻斷實驗發(fā)現(xiàn),Caspase-9激活Caspase-3介導的凋亡通路參與了牽張應變誘導HPDLCs的凋亡；
　　 6、通過基因芯片檢測牽張應變前后凋亡相關基因變化的研究發(fā)現(xiàn),20％-6h組和20％-24h組分別與對照組比較均有9

5、個表達上調(diào)基因和2個表達下調(diào)基因,20％-6h組和20％-24h組比較有2個表達上調(diào)基因和1個表達下調(diào)基因。
　　 結論：通過動態(tài)機械應變細胞加載裝置對人牙周膜細胞的牽張加載,發(fā)現(xiàn)牽張應變可以誘導細胞發(fā)生晚期凋亡,且具有時間和應變值依賴性,24h時晚期調(diào)亡率達到峰值,Caspase-3活性與凋亡率變化趨勢一致,且Caspase-9激活Caspase-3介導的凋亡通路參與了牽張應變誘導HPDLCs的凋亡。此外,通過基因芯片檢測,初