玉紅膏對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合過(guò)程中整合素β-,1-、轉(zhuǎn)錄因子p63影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 利用大鼠全層皮膚缺損模型，評(píng)價(jià)玉紅膏的療效，研究其對(duì)整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63的影響，探討玉紅膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)理。 方法 采用剪去全皮的方法在大鼠背部造成3個(gè)直徑為1.8 cm的圓形全層皮膚缺損動(dòng)物模型，108只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，玉紅膏組、京萬(wàn)紅(陽(yáng)性對(duì)照)組、模型組，每組36只動(dòng)物，另設(shè)正常組6只。玉紅膏組造模后立即外敷玉紅膏，每個(gè)創(chuàng)面0.1 g；京萬(wàn)紅組每個(gè)創(chuàng)面外敷京萬(wàn)

2、紅0.1 g，2組均每日定時(shí)換藥2次至創(chuàng)面愈合，于造模后第1、3、5、7、14、21天6個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察記錄創(chuàng)面的愈合情況及愈合時(shí)間、測(cè)量創(chuàng)面直徑；制備組織切片進(jìn)行HE染色和整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63的免疫組化染色。分別進(jìn)行創(chuàng)面愈合率的計(jì)算并用光學(xué)顯微鏡觀察皮膚再生情況；在20倍物鏡下觀察免疫組化染色結(jié)果，利用Image-Pro-P1us圖像分析軟件對(duì)整合素β<,1>進(jìn)行OD值分析，對(duì)轉(zhuǎn)錄因子p63進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞率統(tǒng)計(jì)。所有計(jì)量數(shù)據(jù)以x

3、 ±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)服從正態(tài)分布的組間計(jì)量資料進(jìn)行單因素方差分析。 結(jié)果 ①大體觀察：在創(chuàng)傷后的早期，即造模后第1天，第3天，玉紅膏組創(chuàng)面滲出物較多且濃稠，而京萬(wàn)紅組和模型組滲出物較少且稀??；愈合過(guò)程中肉芽組織生長(zhǎng)和再上皮化情況玉紅膏組和京萬(wàn)紅組無(wú)明顯差別，均優(yōu)于模型組。②玉紅膏組、京萬(wàn)紅組和模型組的創(chuàng)面愈合時(shí)間分別為(13.5±0.9)d、(12.6±0.9)d和(19.1±2.6)d，玉紅膏組和

4、京萬(wàn)紅組的創(chuàng)面愈合時(shí)間較模型組明顯縮短，在同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)玉紅膏組和京萬(wàn)紅組的創(chuàng)面愈合率均高于模型組，(P<0.05)。③HE染色結(jié)果顯示，炎癥期的炎細(xì)胞浸潤(rùn)、增生期的肉芽組織增生、重塑期的膠原排列情況玉紅膏組和京萬(wàn)紅組無(wú)明顯差別，均優(yōu)于模型組。按照組織病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，指標(biāo)膠原纖維束的評(píng)價(jià)結(jié)果：玉紅膏組和京萬(wàn)紅組均明顯優(yōu)于模型組(P<0.01)，說(shuō)明玉紅膏有改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量的作用。④整合素β<,1>免疫組化染色圖像分析結(jié)果：從造模第1天起整

5、合素β<,1>OD值開(kāi)始有明顯的增加，在第1天、第3天、第5天、第7天、第14天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)玉紅膏組、京萬(wàn)紅組、模型組與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，直至創(chuàng)面完全愈合的第21天3組OD值才與正常組無(wú)差別(P>0.05)；玉紅膏組、京萬(wàn)紅組均是在第7天達(dá)到OD值的峰值，而模型組則延遲至第14天；玉紅膏組和京萬(wàn)紅組進(jìn)行比較，在創(chuàng)傷后的第7天和第14天2個(gè)時(shí)間點(diǎn)玉紅膏組的OD值明顯高于京萬(wàn)紅組(P<0.05)。⑤轉(zhuǎn)錄因子p63免

6、疫組化染色圖像分析結(jié)果：創(chuàng)傷后各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)傷皮膚表皮層的轉(zhuǎn)錄因子p63的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均高于正常組(P<0.05)；在造模后第1天京萬(wàn)紅組與模型組差別不明顯，而玉紅膏組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；玉紅膏組、京萬(wàn)紅組均是在第7天達(dá)到峰值，而模型組則延遲至第14天：至創(chuàng)面完全愈合的第21天，玉紅膏組、京萬(wàn)紅組與正常組仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。⑥免疫組化染色顯示整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63在組織中的表達(dá)定位：在正常皮膚，整合

7、素β<,1>陽(yáng)性細(xì)胞零星分布于表皮基底層，毛囊的外根鞘部；轉(zhuǎn)錄因子p63陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布于表皮基底層和毛囊及皮脂腺的上皮層。但在創(chuàng)傷皮膚，從傷后第1天開(kāi)始，隨著時(shí)間的推移，整合素β<,1>陽(yáng)性細(xì)胞的定位分布不僅在上述組織結(jié)構(gòu)中，在表皮層陽(yáng)性細(xì)胞的分布由正常皮膚那樣零星于表皮基底層，逐漸增加為基底層以及以上的幾層，特征性的改變是棘層或顆粒層出現(xiàn)多個(gè)散在的陽(yáng)性細(xì)胞，且越接近創(chuàng)面這些陽(yáng)性細(xì)胞更加密集；其數(shù)量隨著創(chuàng)面的縮小逐漸增加再減少，至創(chuàng)面

8、愈合、完全上皮化，這些陽(yáng)性細(xì)胞仍然存在。轉(zhuǎn)錄因子p63陽(yáng)性細(xì)胞在表皮層的分布由在基底層的單層分布變?yōu)榧瑢雍皖w粒層也有分布，且越接近創(chuàng)緣陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)越多，在數(shù)量上也是隨著時(shí)間的推移逐漸增多再減少的過(guò)程，至創(chuàng)面完全愈合。這些陽(yáng)性細(xì)胞在表皮層的分布也是在基底層及以上的2～3層。光鏡下，2個(gè)指標(biāo)模型組在陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量及著色強(qiáng)度上均明顯遜于玉紅膏組和京萬(wàn)紅組。討論由于整合素β<,1>在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中有重要作用，推測(cè)玉紅膏和京萬(wàn)紅通過(guò)影響細(xì)胞間信號(hào)傳遞來(lái)

9、促進(jìn)創(chuàng)面愈合；另外整合素β<,1>還是表皮干細(xì)胞和短暫增殖細(xì)胞的標(biāo)志物，玉紅膏組與模型組的OD值比較差異明顯(P<0.05)，推測(cè)玉紅膏有促進(jìn)表皮干細(xì)胞增殖分化的作用。由于轉(zhuǎn)錄因子p63在增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞中表達(dá)，因此統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明玉紅膏組表皮層細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力，提示玉紅膏有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。 結(jié)論 ①玉紅膏具有促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合的能力，能夠提高愈合速度，改善愈合質(zhì)量。②玉紅膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)理可能與整合素β<,1