金匱腎氣丸對(duì)衰老模型小鼠端粒酶的影響.pdf

1、本課題在總結(jié)傳統(tǒng)中醫(yī)對(duì)衰老的認(rèn)識(shí)與探討的基礎(chǔ)上，結(jié)合抗衰老的現(xiàn)代研究機(jī)制，對(duì)祖國(guó)醫(yī)學(xué)中具有溫補(bǔ)腎陽(yáng)功效的金匱腎氣丸進(jìn)行抗衰老機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，為中醫(yī)藥抗衰老提供實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)造模和治療：分別給模型對(duì)照組、試驗(yàn)組小鼠頸部皮下注射D-半乳糖溶液(100mg/kg)，同時(shí)給正常對(duì)照組小鼠頸部皮下注入相應(yīng)體積的生理鹽水，每日一次，連續(xù)42天。同時(shí)，試驗(yàn)組從造模第8天開(kāi)始，每天給予金匱腎氣丸水煎液灌胃(1

2、.17g/kg)，一天一次，連續(xù)35天給藥。
　　 (2)D-半乳糖衰老模型小鼠的評(píng)價(jià)：觀測(cè)小鼠的一般體征、體重和血清的總抗氧化能力(T-AOC)。
　　 (3)組織中端粒酶(TE)含量的測(cè)定：使用ELISA試劑盒測(cè)定小鼠腦組織、肝組織以及脾組織樣本中TE的含量。
　　 (4)TRET基因和β-actin基因片段的克隆：提取小鼠腦組織、肝組織以及脾組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄后以cDNA為模板擴(kuò)增TRET基因和β-act

3、in基因，回收擴(kuò)增的各基因片段與PEZ-T質(zhì)粒載體連接、轉(zhuǎn)化，鑒定陽(yáng)性克隆后測(cè)序。
　　 (5)TERT基因相對(duì)表達(dá)水平的檢測(cè)：以各克隆的基因片段的重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物和效率進(jìn)行分析，優(yōu)化反應(yīng)條件。然后，分別以各組每個(gè)樣本的cDNA為模板，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組小鼠TERT基因的相對(duì)表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較，呈現(xiàn)出明顯的衰老的體征，體重增長(zhǎng)

4、緩慢(P<0.01)，血清T-AOC降低極顯著(P<0.01)。灌服金匱腎氣丸水煎液后，衰老模型小鼠在食欲、毛色等方面得到了明顯改善；末次體重(P<0.05)和增重(P<0.01)均明顯增加；血清的T-AOC有顯著升高(P<0.05)：能顯著提高衰老模型小鼠腦組織(P<0.01)和肝組織(P<0.01)中端粒酶的含量，但是對(duì)脾組織中端粒酶的含量改變不顯著(P>0.05)；能顯著上調(diào)TERT基因在腦組織(P<0.01)、肝組織(P<0.0