部分變性高效液相色譜法檢測(cè)胃癌組織、血漿及腹腔沖洗液中基因突變的研究.pdf

1、目的變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù).該研究通過應(yīng)用該技術(shù)檢測(cè)胃癌組織、血漿及腹腔沖洗液中相關(guān)基因突變,探討了其在檢測(cè)實(shí)體腫瘤體細(xì)胞突變中的一些應(yīng)用特點(diǎn),闡明所檢測(cè)的相關(guān)基因在胃癌中表達(dá)的意義,擬建立一種快速、方便、準(zhǔn)確地篩查胃癌組織、血漿及腹腔沖洗液中基因突變的新方法.結(jié)論1首次應(yīng)用DHPLC檢測(cè)胃癌組織中

2、體細(xì)胞基因突變,并證實(shí)胃癌組織中非腫瘤細(xì)胞可以提供足量的野生型DNA,因此在檢測(cè)胃癌組織突變時(shí),可不加入野生型DNA而直接檢測(cè).選用DHPLC檢測(cè)溫度時(shí),兩種選擇方法各有優(yōu)點(diǎn).但在檢測(cè)樣本量較大時(shí),以選用檢測(cè)溫度數(shù)較少的方法2(應(yīng)用DHPLC儀隨機(jī)攜帶的Wavemaker4.1融解曲線,結(jié)合操作者使用經(jīng)驗(yàn)判斷及摸索確定檢測(cè)溫度)較為適宜,且選用的相鄰溫度溫差不大于2℃時(shí),均不會(huì)造成漏檢.只要注意調(diào)整B液濃度梯度,避免雜質(zhì)峰的干擾,及注意

3、與相應(yīng)正常對(duì)照平行檢測(cè),普通Taq酶可以用于DHPLC的檢測(cè),并可獲得較好的效果.2首次應(yīng)用DHPLC檢測(cè)胃癌組織中p53基因突變,該組中p53基因突變率與既往報(bào)道相似.在腸型胃癌中突變率明顯高于彌漫型胃癌.發(fā)現(xiàn)既往未見報(bào)道的p53基因突變3例.首次在胃癌中檢測(cè)CHK2基因和ST7基因突變.該組中未發(fā)現(xiàn)CHK2基因突變說明其2個(gè)突變熱點(diǎn)在胃癌的發(fā)生發(fā)展中可能不起主要作用.該組中未發(fā)現(xiàn)ST7基因突變,可能提示在7q31區(qū)域可能另有其它抑癌