慢性再障患兒外周血端粒長度及端粒酶基因突變的研究.pdf

1、再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA簡稱再障）是常見的骨髓衰竭性疾病，是兒童時期嚴重的血液系統(tǒng)疾病之一，臨床表現為貧血、出血及感染等。其發(fā)病機制尚未完全闡明，臨床表現多樣化，因此，個體化治療及預后判斷均有一定的難度。目前認為AA的發(fā)病是由于多種致病因素引起造血干細胞減少或損傷、T淋巴細胞功能異常亢進、細胞毒性T細胞直接殺傷和淋巴因子介導的與免疫相關的造血干細胞過度凋亡而造成骨髓造血功能衰竭。
　　近年來，端粒、端粒

2、酶與細胞衰老、癌變及DNA修復的密切關系逐漸引起國內外學者的關注。端粒是真核細胞內線性染色體末端的一種特殊的“帽狀”結構，其主要功能是保持染色體的完整性，避免染色體末端融合、重組和丟失，維持細胞的復制能力。端粒隨細胞的復制、分裂進行性縮短，達到一定程度后不能維持染色體的穩(wěn)定性，細胞便走向衰老死亡。端粒長度的維持和延伸需要端粒酶的活性作用，端粒酶是一種核糖核蛋白復合體，以其自身的RNA為模板，通過端粒酶逆轉錄酶組分及相關蛋白不斷在染色體末

3、端合成端粒序列。端粒酶活性的異?？梢砸鸲肆ｉL度的改變。
　　既往研究表明，攜帶端粒酶基因突變的再障患者端粒酶活性下降，外周血單個核細胞端粒長度縮短。兒童造血骨髓容量相對多于成人，且骨髓造血功能代償能力較強，有實驗顯示，再障患兒骨髓造血干細胞端粒酶活性升高，那么其外周血端粒長度的變化如何？是否有端粒酶基因突變？本文擬就此進行初步研究。
　　目的：
　　探討慢性再生障礙性貧血患兒外周血白細胞端粒長度變化及端粒酶TERC、

4、TERT基因突變情況。研究端粒長度與端粒酶基因突變在再障患兒發(fā)病及病情進展中的臨床意義，為判斷預后及指導個體化治療提供參考。
　　材料與方法：
　　選取2011年6月至2013年6月鄭州大學第一附屬醫(yī)院及第三附屬醫(yī)院就診的慢性再生障礙性貧血患兒，其中初次確診未接受免疫抑制治療者24例，接受免疫抑制治療后基本治愈、緩解及明顯進步（有效組）患兒36例，接受免疫治療無效者9例，三組患兒性別、年齡、病程無顯著性差異。同時隨機選擇同期

5、于鄭州大學第三附屬醫(yī)院進行體檢的年齡及性別匹配的健康兒童35例。利用實時熒光定量PCR法檢測端粒相對長度，對端粒酶TERC、TERT1、TERT2基因PCR擴增產物進行基因測序。結果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，用均數±標準差((x)±s)表示，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。端粒酶基因序列分析結果與PubmedBLAST中正常TERC、TERT1、TERT2基因序列進行比對。
　　結果：
　　1.初診組端粒長度相對T/

6、S比率為0.756±0.299，較正常對照組0.980±0.374縮短(P=0.017)。
　　2.經IST有效組端粒長度相對T/S比率為0.877±0.398，與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.247)。經IST無效組端粒長度相對T/S比率0.561±0.228，與正常對照組及IST有效組相比均縮短（P＜0.05）。
　　3.69例AA患兒及35例正常對照組測序結果均未發(fā)現TERC、TERT1、TERT2基因突變。