人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達(dá)及純化.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達(dá)及純化姓名：李航宇申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：郭仁宣20050201中文結(jié)構(gòu)式摘要人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達(dá)及純化目的熱休克蛋白70(heatshockprotein70，HSPT0)做為肽的運(yùn)載工具，參與人體內(nèi)諸多重要的生理功能。近年來，關(guān)于HSPT0與腫瘤免疫的研究成為熱點(diǎn)。目前，已有國外研究機(jī)構(gòu)，應(yīng)用HSPT0一肽復(fù)合物進(jìn)行某些腫瘤的臨床

2、治療。但由于對HSPT0參與腫瘤免疫的機(jī)制了解有限，這種治療方法只限于個體化的腫瘤治療，不便臨床廣泛應(yīng)用。因此，進(jìn)一步闡明HSP70在機(jī)體腫瘤免疫過程中的作用及方式是突破這一“瓶頸”的關(guān)鍵，而獲得純化的HSPT0是進(jìn)行這方面研究的基礎(chǔ)。本研究通過構(gòu)建HSP70的原核表達(dá)載體，試圖體外獲得純化的HSP70蛋白。方法1擴(kuò)增目的基因：用SDS裂解的方法從膽管癌組織中提取基因組DNA作為模板。根據(jù)Genebank中HSP70基因的核酸序列(M1

3、1717)設(shè)計一對引物，序列如下：5’端引物：5’一AAGAATTCATGGCCAAAGCCGCaZAGTCG一3’(劃線處為EcoRI酶切位點(diǎn))；3’端引物：5’一ACCTCGAGCTAATC一7rACCTCCTCAATGGTG一3’(劃線處為XhoI酶切位點(diǎn))，由寶生物工程(大連)有限公司合成。使用TaK冰aPlrrobestTMDNAPolymerasePCR擴(kuò)增目的基因(10PyrobestBuffer5出、25mmol／LdN