基因工程內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤的研究.pdf

1、第一部分：CD133免疫磁珠分選臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定 目的:建立具備高效增殖、血管生成與遷移能力的臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)分離培養(yǎng)鑒定方法。 方法:應(yīng)用免疫磁珠分選純化臍血單個(gè)核細(xì)胞中的CD133+細(xì)胞，體外EGM-2MV培養(yǎng)液培養(yǎng)擴(kuò)增，通過(guò)形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表面標(biāo)志及功能鑒定EPCs，并與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothe

2、lial cells，HUVECs)作比較. 結(jié)論:通過(guò)CD133免疫磁殊分選臍血單個(gè)核細(xì)胞，可培養(yǎng)出具有高效增殖、血管生成與遷移能力的EPCs。 第二部分：膠質(zhì)瘤誘導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞血管新生的機(jī)制初探　 目的:初步探討內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)參與膠質(zhì)瘤血管新生的機(jī)制。 方法:通過(guò)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清作用于EPCs，觀察EPCs體外血管形成以及遷移能力

3、，并檢測(cè)VEGFR-1、VEGFR-2與MMP-9的表達(dá)。VEGFR-2 siRNA轉(zhuǎn)染EPCs，觀察對(duì)EPCs參與血管新生的影響，檢測(cè)VEGFR-2、MMP-9、Akt和ERK的表達(dá)。 結(jié)論:膠質(zhì)瘤細(xì)胞通過(guò)上調(diào)EPCs VEGFR-2調(diào)控MMP-9、Akt和ERK的表達(dá)，從而誘導(dǎo)EPCs參與其血管新生。 第三部分：HSV-TK轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮祖細(xì)胞的靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外實(shí)驗(yàn) 目的:以?xún)?nèi)皮祖細(xì)胞(endothe

4、lial progenitor cells，EPCs)為載體，探討轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs，靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外治療作用。 方法:重組腺病毒Ad.CMV-tk轉(zhuǎn)染EPCs后，經(jīng)GCV作用，觀察其敏感性；將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs和U87與U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以不同比例混合，經(jīng)GCV作用，以MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡。將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs經(jīng)尾靜脈注入裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型，觀察各組腫