油酸調(diào)節(jié)水甘油通道蛋白在肝臟中表達的相關信號分子機制.pdf

1、目的:研究油酸在非酒精性脂肪變性肝細胞模型中誘導水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins) AQP3、AQP9表達改變的相關信號分子機制。
　　 方法:采用不同濃度油酸干預人肝癌HepG2細胞構建非酒精性脂肪變性肝細胞模型，油紅O染色及OD值測定分析肝細胞脂肪變性程度，實時熒光定量PCR與Western blot方法確定油酸誘導AQP3、AQP9表達變化的最佳濃度，然后以油酸最佳干預濃度以及不同信號通路抑制劑分別聯(lián)合誘

2、導HepG2細胞，以常規(guī)培養(yǎng)的HepG2細胞為對照組，利用qRT-PCR和Western blot方法檢測分析參與油酸鈉誘導AQP3、AQP9表達水平改變的相關信號分子機制。
　　 結果:油紅O染色及其OD值測定結果顯示隨著油酸誘導濃度的升高(0-500μmol/L)，脂肪變性程度逐漸加重，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。qRT-PCR和Western blot方法檢測結果表明油酸的刺激可以下調(diào)AQP3的表達量而上調(diào)AQP9的

3、表達，其作用均呈劑量依賴性，確定500μmol/L作為油酸干預的最佳刺激濃度。qRT-PCR檢測不同信號通路抑制劑干預對油酸誘導AQPs表達改變的結果表明，油酸對AQP3 mRNA的抑制作用僅能被SB203580逆轉;對AQP9 mRNA而言，LY294004的干預能夠增強油酸的刺激作用，SB203580則能抑制其表達上調(diào);PD98059和SP600125的干預則無明顯作用。AQP3、AQP9蛋白表達的改變同基因水平基本一致。進一步研究

4、表明，油酸的刺激作用可使Akt磷酸化水平下降而p38磷酸化水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。p-ERK1/2和p-JNK水平無明顯改變。
　　 結論:油酸可呈劑量依賴方式誘導AQP3表達量下降而AQP9表達量升高，其中PI3K/Akt信號通路的抑制參與了油酸對AQP3表達量的下調(diào)，而AQP9的調(diào)節(jié)還涉及了p38 MAPK途徑的激活，表明油酸在非酒精性脂肪變性肝細胞模型中是通過不同信號轉導通路調(diào)節(jié)AQP3和AQP9的表達