腸外致病性大腸桿菌icmF基因功能研究和侵入腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因的篩選.pdf

1、腸外致病性大腸桿菌是一類(lèi)在特定情況下能引起宿主腸道以外組織感染的病原菌，主要引發(fā)肺部感染、泌尿系統(tǒng)感染和腦膜炎等。盡管已經(jīng)有很多毒力因子被報(bào)道參與了上述致病過(guò)程，但仍有許多細(xì)節(jié)未得到清楚的解釋。細(xì)菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)已被鑒定存在于包括腸外致病性大腸桿菌在內(nèi)的多種致病菌中，在細(xì)菌致病過(guò)程中起到重要作用。本課題利用實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的大腸桿菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)基因缺失株△hcp1-3和新構(gòu)建的icmF基因缺失株△icmF，研究icmF基因在豬腸外致病性大腸

2、桿菌PCN033中的作用。
　　主要取得以下結(jié)果:
　　(1)成功利用正反篩選系統(tǒng)構(gòu)建了icmF基因敲除突變株，并改進(jìn)了突變株的篩選方法。
　　(2)表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，T6SS相關(guān)基因缺失并不影響細(xì)菌的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)和抗藥能力，但能顯著增強(qiáng)細(xì)菌形成生物被膜的能力。
　　(3)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，T6SS功能的缺失導(dǎo)致細(xì)菌粘附、侵入上皮細(xì)胞能力增強(qiáng)。另外，T6SS功能的缺失并不影響細(xì)菌對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性，但極顯著的降低了細(xì)

3、菌抵抗巨噬細(xì)胞吞噬和在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活的能力。在所有的表型檢測(cè)中，△icmF和△hcp1-3的表現(xiàn)基本相同，可以初步認(rèn)為icmF基因功能與T6SS緊密相關(guān)。
　　為了進(jìn)一步了解致腦膜炎大腸桿菌的致病機(jī)制，本研究進(jìn)一步構(gòu)建了腦膜炎模式菌株RS218的Tn5轉(zhuǎn)座子突變體庫(kù)。以人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞為模型，篩選侵入能力缺陷的突變株。通過(guò)對(duì)764株突變株的篩選，初步獲得33株侵入能力明顯下降的突變株。進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)候選突變株的生長(zhǎng)速率，篩選掉2