FSH、GnRH在大鼠海馬的表達及其對缺血再灌注損傷的保護性研究.pdf

1、促性腺激素釋放激素（GnRH）是由下丘腦神經元分泌的十肽小分子，促性腺激素釋放激素受體（gonadotropin-releasinghormonereceptor,GnRHR）屬于七次跨膜的G蛋白耦聯受體超家族。GnRH與GnRHR結合后，調節(jié)促性腺激素細胞分泌黃體生成素(luteininghormone,LH)和卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone,FSH)，在生殖過程中發(fā)揮重要作。促性腺激素包括FSH和

2、LH，他們都是由α，β亞單位構成的二聚體糖蛋白。FSHR和LHR都是具有7個跨膜結構的G蛋白耦聯受體。FSH和LH的分泌都受到下丘腦分泌的GnRH的調控。近年來的研究發(fā)現，GnRH及其受體還存在于下丘腦-垂體-性腺軸以外的腦組織、消化道、頜下腺、胰腺等消化器官以及前列腺癌等腫瘤細胞中，其功能也超出了生殖范疇。作為雌激素上游激素的GnRH及其受體在海馬內也廣泛存在，但未見有對其在缺血損傷下表達變化的報道。除垂體外，多種組織內均有FSH的存

3、在。生殖系統(tǒng)中FSH可存在于前列腺，乳腺，睪丸，以及胎盤。在非生殖系統(tǒng)內可存在于胃的壁細胞，其功能也超出了生殖調控的范疇。FSHR除了在性腺中表達之外，也表達于輸卵管上皮和子宮頸等部位。近年的研究發(fā)現，大鼠海馬神經元中存在許多激素及其受體，其中包括作為生殖激素的GnRH、LH及它們的受體，但未見有存在FSH及其受體的報道。腦缺血再灌注損傷可以引發(fā)選擇性的、延遲的神經元死亡，這種死亡主要是通過神經元的凋亡所引起的。近年來的研究已經表明，雌

4、激素對海馬CA1區(qū)缺血引起的神經元損傷和神經元凋亡具有保護作用，并且這種保護性作用是通過海馬內的雌激素受體實現。GnRH及FSH是雌激素的上游激素，關于GnRH及FSH對海馬神經元缺血再灌注損傷的保護性研究未見報道。
　　由此我們進行了以下研究：應用原位雜交及免疫組織化學方法，結合圖像分析系統(tǒng)，觀察了缺血再灌注損傷后大鼠海馬CA1區(qū)神經元GnRH及其受體的表達變化；應用原位雜交方法觀察了FSH在大鼠海馬的表達；應用免疫熒光組織化學

5、雙標記方法，在激光共聚焦顯微鏡下進行了大鼠海馬FSH及其受體的共定位研究；應用免疫組織化學鄰片雙標記方法進行了大鼠海馬FSH與GnRHR的共定位研究；通過制作大鼠MCAO模型、進行TUNEL染色的體內實驗及制作大鼠海馬神經元OGD模型、進行流式細胞儀AnnexinV/PI雙染色法檢測的體外實驗進行了FSH、GnRH對大鼠海馬神經元缺血再灌注損傷的保護性研究。
　　通過實驗得到主要研究結果如下：大鼠海馬CA1區(qū)神經元GnRH及GnR

6、HmRNA的表達量隨缺血再灌注損傷時間的延長而減少，陽性細胞數也隨損傷時間延長而迅速減少。GnRHR及GnRHRmRNA的表達量隨缺血再灌注損傷時間的延長先增加后減少，陽性細胞數隨損傷時間延長而減少。損傷后3d,CA1區(qū)多型層及輻射層出現較多GnRH、GnRHR免疫反應及GnRH、GnRHRmRNA雜交信號弱陽性細胞；海馬CA1至CA4區(qū)及齒狀回的神經元呈FSH免疫反應陽性，同時也顯示FSHmRNA陽性雜交信號，海馬CA1至CA4區(qū)及齒

7、狀回的神經元呈FSHR免疫反應陽性，FSH和FSHR共定位于海馬的同一神經元，FSH和GnRHR共定位于同一海馬神經元；缺血再灌注損傷后72h，FSH干預組和GnRH干預組CA1區(qū)TUNEL染色陽性神經元平均灰度值大于對照組，即FSH干預組和GnRH干預組TUNEL染色陽性產物少于對照組。缺血再灌注損傷后72h，FSH干預組和GnRH干預組CA1區(qū)TUNEL染色陽性神經元數量比對照組少；FSH干預組、GnRH干預組與對照組相比，凋亡神經

8、元百分比增加，存活神經元百分比減少。FSH干預組、GnRH干預組與無干預組相比，凋亡細胞百分比減少，存活細胞百分比增加。
　　綜上所述，本研究結果表明：缺血再灌注損傷后，大鼠海馬CA1區(qū)神經元GnRH及GnRHR的表達發(fā)生變化，GnRH可能參與CA1區(qū)腦組織損傷后修復過程的調節(jié)；海馬能表達FSH，海馬的FSH神經元也是FSH作用的靶細胞。海馬神經元產生的FSH可能通過旁分泌和自分泌途徑對海馬的功能進行調節(jié)，海馬產生的GnRH也可能