鹽酸多西環(huán)素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的
　　研究?jī)?nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷(Acutelunginjury,ALI)大鼠動(dòng)脈血氧分壓(PartialpressureO2,PaO2)、肺組織濕/干重(W/D)比值、肺組織病理形態(tài)學(xué)、肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2（Matrixmetalloproteinase-2,MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）表達(dá)的變化及其鹽酸多西環(huán)素(Doxycycline，DOX)對(duì)ALI

2、的保護(hù)作用，為臨床防治ALI提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法
　　本研究應(yīng)用氣管內(nèi)滴注脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）的方法復(fù)制大鼠ALI模型。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，無(wú)特定病原體(Speceficpathogenfree,SPF)級(jí)，體重在220～250g之間，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(n=24)、ALI組(n=24)﹑治療組(n=24)。每組動(dòng)物按時(shí)間點(diǎn)分為4個(gè)亞組(n=6)，分別在氣管內(nèi)滴注L

3、PS后1h、2h、4h和8h進(jìn)行觀察。對(duì)照組：0h氣管內(nèi)滴注生理鹽水(NS)0.3ml，10min后股靜脈注射N(xiāo)S1ml。ALI組：0h氣管內(nèi)滴注LPS0.2mg／kg(溶于0.3mlNS)，10min后股靜脈注射N(xiāo)S1ml。治療組：0h氣管內(nèi)滴注LPS0.2mg／kg(溶于0.3mlNS)，10min后股靜脈注射DOX20mg／kg(溶于1mlNS)。在設(shè)定時(shí)間點(diǎn)，即實(shí)驗(yàn)的1h、2h、4h和8h經(jīng)左心室穿刺取血2ml行血?dú)夥治?；隨后處

4、死動(dòng)物，觀察肺組織濕/干重(W/D)比值、病理形態(tài)學(xué)的變化，同時(shí)免疫組織化學(xué)和免疫印跡（WesternBlot）法檢測(cè)MMP-2和MMP－9在肺組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1．血?dú)夥治觯号c對(duì)照組比較，ALI組和治療組在LPS致傷后1h至8h動(dòng)脈血PaO2均顯著降低（P<0.01），但治療組各時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)脈血PaO2均顯著高于ALI組（P<0.05～0.01）。
　　2．W/D比值：與對(duì)照組比較，ALI組和治療組1h至8

5、hW/D比值顯著增加（P<0.01），但治療組各時(shí)間點(diǎn)的W/D比值較ALI組顯著降低（P<0.05～0.01）。
　　3．病理形態(tài)學(xué)觀察見(jiàn)對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)基本正常,肺泡結(jié)構(gòu)清晰;ALI組肺彌漫性充血水腫,血管周?chē)胺闻萸粌?nèi)有大量滲出液,肺泡間隔增寬,肺間質(zhì)有大量多形核白細(xì)胞浸潤(rùn)且可見(jiàn)肺透明膜形成;治療組肺泡結(jié)構(gòu)尚可,肺間質(zhì)及肺泡內(nèi)水腫液滲出、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度較ALI組明顯減輕。
　　4.免疫組織化學(xué)檢查見(jiàn)MMP-2主要定位

6、于肺泡和支氣管黏膜上皮細(xì)胞，支氣管壁平滑肌細(xì)胞、腺體，肺間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞;MMP-9定位基本同MMP-2。正常肺組織中,MMP-2和MMP-9均呈弱陽(yáng)性表達(dá);ALI組MMP-2和MMP-9呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);治療組大鼠肺組織MMP-2和MMP-9表達(dá)較ALI組明顯減弱(P<0.01)。
　　5.WesternBlot檢測(cè)顯示對(duì)照組肺組織中MMP-2和MMP-9有少量表達(dá),ALI組和治療組MMP-2、MMP-9表達(dá)在各時(shí)相點(diǎn)均