HO-1在鉛致SH-SY5Y細胞毒性中保護作用的研究.pdf

1、目的：鉛是環(huán)境中廣泛存在的一種有毒的重金屬，對人體有很嚴重的毒副作用。長期鉛暴露對機體多個系統(tǒng)均有不良影響，其中危害最為嚴重的就是鉛的神經(jīng)毒性。血紅素加氧酶-1（Heme oxygenase，HO-1）在機體對抗外界環(huán)境因素刺激作用產(chǎn)生的一系列應激防御中起著重要作用。研究表明，HO-1的誘導表達對某些外來化合物的毒性具有一定的細胞保護作用，但HO-1的誘導表達能否對鉛所致神經(jīng)毒性具有良性作用仍不清楚。本實驗通過鈷原卟啉（CoPP）誘導S

2、H-SY5Y細胞內(nèi)HO-1過表達，研究HO-1對鉛所致SH-SY5Y細胞毒性作用及相關(guān)的機制。
　　方法：用不同劑量的CoPP溶液（1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L）誘導HO-1在SH-SY5Y細胞內(nèi)表達，確定適宜的CoPP預處理濃度；然后用CoPP預處理細胞24h，隨后對細胞進行醋酸鉛染毒。采用CCK-8法檢測細胞活性，內(nèi)源性CO水平用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定，用2’，7’-二氯

3、熒光黃雙乙酸鹽熒光探針檢測細胞染毒6h后活性氧含量；用JC-10檢測線粒體膜電位；用Hoechst染色測細胞凋亡；熒光檢測Caspase-3/7活性；用western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果：與對照組相比，CoPP處理使HO-1表達升高，并呈現(xiàn)出劑量依賴性，結(jié)果顯示5μmol/L CoPP作為預處理細胞的濃度較為適宜；CCK-8實驗表明，與鉛染毒組相比較，CoPP預處理的醋酸鉛染毒組細胞存活率升高；ELISA

4、方法測定內(nèi)源性CO表明PbAc染毒降低內(nèi)源性CO的含量（P<0.05），CoPP預處理的PbAc染毒組內(nèi)源性CO的含量與PbAc染毒組相比明顯增加（P<0.05）；醋酸鉛顯著增加SH-SY5Y細胞內(nèi)ROS含量（P<0.05），CoPP預處理的醋酸鉛染毒組細胞內(nèi)ROS含量明顯降低（P<0.05）；JC-10熒光探針檢測線粒體膜電位顯示，PbAc染毒使細胞線粒體膜電位明顯降低（P<0.05），CoPP預處理的PbAc染毒組膜電位與單純?nèi)径窘M

5、相比有明顯升高（P<0.05）；Hoechst染色顯示，PbAc導致神經(jīng)細胞的凋亡增加（P<0.05），CoPP預處理的醋酸鉛染毒組細胞凋亡率明顯降低（P<0.05）；熒光測Caspase-3/7活性顯示，醋酸鉛導致SH-SY5Y細胞內(nèi)Caspase-3/7活性增加（P<0.05），CoPP預處理的醋酸鉛染毒組細胞內(nèi)Caspase-3/7活性明顯降低（P<0.05）；western blot結(jié)果顯示，鉛染毒致使細胞內(nèi)Bax蛋白表達水平升