急性肺栓塞大鼠肝細胞生長因子的變化.pdf

1、目的：本實驗采用自體血栓回輸法建立急性肺栓塞(acutepulmonaryembolismAPE)大鼠模型,固相夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血漿中肝細胞生長因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)含量,免疫組化法觀察HGF在肺組織中的表達水平,通過檢測肺栓塞后血漿HGF含量及肺組織中HGF的表達水平,觀察HGF變化趨勢,研究HGF對于肺栓塞的診斷價值,并初步探討HGF在肺栓塞時升高的機制。
　　方法：3

2、2只健康成年SD大鼠(雌雄不限)隨機分為2組:血漿HGF檢測組(16只)和組織HGF檢測組(16只)。每組又可分為對照組和實驗組各8只大鼠。實驗組即模型組,采用自體血栓回輸法建立肺栓塞模型,在無菌條件下斷尾取血1mL,置于無菌導管中,室溫下靜置25~30min,70℃水浴10min,形成牢固血栓。在超聲下將4F鞘管擴張管插入右心房或接近右心房的下腔靜脈處,將預制栓子通過鞘管擴張管分次注入,直至大鼠出現(xiàn)呼吸淺快、躁動不安、喘憋、口唇及耳朵

3、發(fā)紺等缺氧癥狀,心率較術前增加30次/min左右,提示造模成功,停止繼續(xù)注入。對照組即假手術組,以與自體血栓等量生理鹽水注入。血漿HGF檢測組,在造模成功后0、1、6、12、24、48小時,六個時間點采集血樣,ELISA法檢測血漿HGF含量,并觀察HGF的變化趨勢;組織HGF檢測組,在造模成功后12h處死大鼠,取肺、肝和腸組織,10％福爾馬林固定,石蠟包埋后,行HE染色,鏡下尋找栓子,驗證造模成功,并用免疫組化法檢測HGF蛋白在肺組織中

4、的表達,同時觀察肝和腸組織有無血栓。
　　結果：血漿實驗組和組織實驗組分別有1只和2只大鼠死亡,其他實驗組大鼠肺動脈可見栓子,肝、腸組織未發(fā)現(xiàn)梗死現(xiàn)象,顯示造模成功。實驗組血漿HGF在造模后1h開始升高,12h達到高峰,48h后下降至接近正常,實驗組與對照組比較,造模1、6、12和24h血漿HGF差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);急性肺栓塞肺組織中HGF蛋白表達以陽性面積率表示,組織對照組為(0.88±0.26)×10-2,組織實