不同濃度的白消安對樹鼩精子發(fā)生過程的影響.pdf

1、樹鼩是新興的實驗動物，在進化地位及生理生化特征上較嚙齒類更加接近于靈長類。而且樹鼩有很多優(yōu)點，例如它的繁殖周期短，生長發(fā)育周期快，相對于大型靈長類動物其使用價格便宜。這些特征使樹鼩在生物醫(yī)學研究中較非人靈長類模型動物獼猴有更高的實用性和更大的發(fā)展?jié)摿Α，F(xiàn)代生物醫(yī)學研究中，轉(zhuǎn)基因技術是建立疾病動物模型的重要和常用手段。目前還沒有關于轉(zhuǎn)基因樹鼩的研究報道，而建立樹鼩基因操作平臺對于推動樹鼩在生物醫(yī)學研究中的廣泛應用具有決定意義。建立轉(zhuǎn)基因動

2、物模型的方法有多種，而此項研究主要是針對精原干細胞移植這一方面人手。利用精原干細胞移植方法建立轉(zhuǎn)基因動物，首先要清除移植受體自身的生殖細胞（包括精原干細胞及分化的生殖細胞），然后再將供體精原干細胞移植到生精作用受損的受體睪丸曲細精管中，曲細精管內(nèi)環(huán)境可以有效地刺激移植精原干細胞增殖、分化產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因精子。雄性生殖細胞的發(fā)生和發(fā)育受年齡和激素調(diào)控，青春期前完整的生精過程尚未發(fā)生，睪丸曲細精管的主要細胞構成為支持細胞，精原干細胞，以及由精原干

3、細胞通過有絲分裂形成的精母細胞。青春期到來后，曲細精管即開始連續(xù)的生精過程，產(chǎn)生很多分化成熟的細胞。有幾種方法可以消除精原干細胞移植時受體的內(nèi)源性精子發(fā)生，在有關哺乳動物的實驗中，一般采用化學處理的方法，即白消安這種烷化劑處理。。白消安又稱馬利蘭，屬氮芥類烷化劑，化學名為1，4一丁二醇二甲磺酸酯，是甲基磺酸酯類的代表藥物。它也是慢性粒細胞白血病的傳統(tǒng)化療藥物以及造血干細胞移植預處理中最常用的藥物。但隨著該藥物的廣泛使用，發(fā)現(xiàn)長期服用該藥

4、物的男性出現(xiàn)不育現(xiàn)象。白消安能特異殺傷精原干細胞，但對于內(nèi)環(huán)境中的支持細胞損傷較小，內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定有助于精原干細胞的恢復，可以用于制作精原干細胞移植受體。在小鼠中，使用白消安制備精原干細胞移植受體已是非常成熟的技術，也有人使用白消安制備精原干細胞移植用的受體大鼠及獼猴。不同物種中白消安的使用劑量有很大差異，對于小鼠來說需要注射大約30 mg/kg才能有效去除內(nèi)源精原干細胞，大鼠中的劑量約為15 mg/kg，而獼猴注射8-12 mg/kg就

5、可使精子發(fā)生細胞產(chǎn)生不可恢復的損傷。目前樹鼩沒有關于這個方面的研究進展，而這篇文章主要研究目的，根據(jù)白消安對樹鼩睪丸生精功能影響的劑量-時間-效應關系，探討白消安用于制備雄樹鼩長期不育模型和精原干細胞移植受體模型的最佳劑量。通過實驗結果，發(fā)現(xiàn)白消安的使用劑量越高，破壞精子生成需要的時間就越短，生精作用恢復需要的時間也越長，甚至有的可能無法恢復。但白消安的劑量效應在個體間有較大差異，這可能與樹鼩年齡相關。在我們測試的7組劑量中，35 mg