LOXL2在膽管癌侵襲和轉移中作用的初步研究.pdf

1、膽管癌是常見的膽道惡性腫瘤之一，其發(fā)病數(shù)有呈逐年上升的趨勢，而影響其治療和病人遠期生存率的主要因素是腫瘤的局部浸潤和轉移。腫瘤的侵襲和轉移是多基因參與、多步驟完成的復雜過程，其中腫瘤細胞粘附、運動能力的改變，與細胞外基質間的相互作用是腫瘤發(fā)生侵襲轉移的基礎，也是腫瘤浸潤轉移的關鍵環(huán)節(jié)。探討影響這些關鍵環(huán)節(jié)的調控因素將有助于我們更深入的理解膽管癌侵襲和轉移的機制。 賴氨酰氧化酶樣蛋白-2(Lysyl Oxidase Like-2

2、Protein，LOXL2)是賴氨酰氧化酶(lysyl oxidase，LOX)家族的成員之一，基因定位于8p21.2-p21.3。Kirschmann等最初報道了在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中有LOXL2的參與，在具有侵襲和轉移潛能的乳腺癌來源的細胞系中LOXL2蛋白呈高表達，且LOXL2蛋白的表達上調與乳腺腫瘤的侵襲、轉移潛能具有相關性。后來的研究結果也證實LOX2的高表達與腫瘤侵襲呈正相關，甚至在MDCK(一種低轉移潛能的乳腺癌細胞系)細胞系

3、中LOXL2過表達可誘導完整的上皮一間葉樣表型轉化( Epithelial-Mesenchymal transition.EMT)。在LOXL2-shRNA表達的惡性腫瘤中采用RNAi技術沉默LOXL2基因表達后能促使腫瘤生長速度減慢，同時伴隨著腫瘤細胞凋亡的增加，這些結果使LOXL2基因的重要生物學特性得到證明。 能否將LOXL2作為一種新的判斷膽管癌或者是腫瘤預后的一個分子標志？深入研究LOXL2在膽管癌侵襲轉移的作用，有助

4、于我們更深刻的理解腫瘤侵襲轉移的發(fā)生、發(fā)展機制，從而為干預腫瘤侵襲轉移提供新的靶點。 本課題正是基于LOXL2可能是判斷膽管癌預后的一個新的分子標志，它可能調控著腫瘤侵襲、轉移關鍵環(huán)節(jié)的設想，我們以臨床膽管癌組織標本和膽管癌QBC939細胞為研究對象，研究其在膽管癌浸潤和轉移中的作用及其可能的分子機制，也同時為深入研究腫瘤侵襲和轉移的調控機制尋求新的思路和更多的理論依據。 主要研究內容與方法: 1.膽管癌組織LO

5、XL2的表達及其與臨床惡性表型間關系。應用免疫組織化學法檢測LOXL2在臨床膽管癌組織標本中的表達情況，并分析其與膽管癌臨床、病理參數(shù)的關系。 2.沉默LOXL2基因表達后對腫瘤轉移相關蛋白表達的影響。運用RNAi技術，沉默膽管癌QBC939細胞中LOXL2的表達，觀察膽管癌細胞中腫瘤轉移相關蛋白CD44，MMP-9的表達變化情況。膽管癌QBC939細胞中CD44，MMP-9蛋白的表達用免疫組織化學的方法進行檢測。 結果

6、與討論: 膽管癌組織中LOXL2的過表達與腫瘤有無發(fā)生侵襲、轉移差異有統(tǒng)計學意義，但與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤的分化程度差異無關。此研究結果表明，LOXL2的過度表達可能與膽管癌的侵襲、轉移相關，其過度表達或許可以作為膽管癌預后的一個分子標志。 RNAi沉默膽管癌QBC939細胞LOXL2基因表達后，膽管癌QBC939細胞中CD44、MMP-9蛋白的表達較之空質粒陰性對照組明顯下降。提示LOXL2可能在轉錄水平通過以

7、下環(huán)節(jié)調控腫瘤的侵襲、轉移：①LOXL2高表達促進CD44的表達，可相應增強膽管癌細胞與細胞外基質的粘附能力，膽管癌細胞粘附能力的提高促使了癌細胞對細胞外基質和基底膜的粘附，進而促進腫瘤細胞侵襲，轉移的發(fā)生；②LOXL2的高表達可以通過細胞內某些重要的信號轉導通路，增強MMP-9的表達而促進細胞外基質的降解，從而促進腫瘤的轉移。 結論: 1.LOXL2的過度表達可能與膽管癌的侵襲、轉移相關，可以作為判斷膽管癌惡性程度的一