復(fù)制缺陷型重組腺病毒介導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞抑制素基因治療結(jié)腸癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：該實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建含人Endostatin基因的腺病毒載體并包裝成高滴度重組腺病毒,通過(guò)體內(nèi)、外抗結(jié)腸癌作用的實(shí)驗(yàn)研究,初步探索利用腺病毒轉(zhuǎn)染人Endostatin基因進(jìn)行基因治療的可行性.結(jié)果：1.通過(guò)同源重組法獲得了所需的含人Endostatin目的基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒,經(jīng)初步純化后獲得較高的病毒滴度,約1.0×10<'8> PFU/ml;2.重組腺病毒體外感染SW620細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率約為90﹪,Western blot法檢測(cè)

2、到轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清中有Endostatin蛋白的表達(dá);3.Ad-IL<,3>-Endo體外轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞并不影響細(xì)胞的體外增殖能力,但其上清能抑制不同血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng);4.轉(zhuǎn)人Endostatin的SW620細(xì)胞的體內(nèi)致瘤性降低,腫瘤生長(zhǎng)減緩;5.分別經(jīng)瘤體內(nèi)注射和經(jīng)尾靜脈注射給予Ad-IL<,3>-Endo進(jìn)行治療,可使局部腫瘤生長(zhǎng)減緩甚至停滯,荷瘤鼠存活期延長(zhǎng),肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)減少;6.免疫組化可見與對(duì)照相比,腫瘤組織內(nèi)MVD顯著減