Notch-1在結直腸癌中的表達及其臨床義.pdf

1、目的:結直腸癌是一種嚴重威脅人類生命健康的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，統(tǒng)計分析報告顯示其在常見癌癥中位居第三位，發(fā)病率及病死率呈現出日益增高的趨勢。結直腸癌是多種因素、多個基因相互作用逐步發(fā)展的結果，但其具體的發(fā)生發(fā)展機制尚不完全明確。Notch-1包含多種表皮生長因子樣重復序列組成的細胞外區(qū)和多種不同結構域組成的細胞內區(qū)，相對分子質量約為30kD，羧基端位于細胞質內，氨基端位于細胞外。它是一個廣泛存在于生物進化過程中的高度保守分子，參與細胞

2、信號的傳導，調控細胞的增殖、分化、凋亡，并且與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切關系。本課題組前期研究發(fā)現Notch-1在結直腸癌組織過表達，與結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有著一定的關聯。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測結直腸癌患者組織中Notch-1的表達，同時用CCK-8法研究不同濃度DAPT對結直腸癌細胞增殖活性凋亡的影響，為深入了解Notch-1在結直腸癌發(fā)病機制中發(fā)揮的作用提供理論依據。
　　方法:
　　1、收集2002

3、年9月～2012年9月40例來自河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院結直腸癌手術標本。每例標本分別取自結直腸原發(fā)腫瘤組織及上（下）切緣正常黏膜且術后病理證實無癌組織侵犯的癌旁組織。新鮮標本離體后迅速置于液氮中，于-80℃保存。40名患者術前未接受任何化療和放療。
　　2、選取結直腸癌細胞株HCT116進行細胞培養(yǎng)。
　　3、應用qRT-PCR方法檢測40例結直腸癌組織及對應結直腸正常黏膜組織中Notch-1的表達水平，

4、比較兩組間表達差異，并分析Notch-1的表達與結直腸癌患者臨床病理特征的關系。
　　4、對HCT116細胞進行不同濃度DAPT處理，將不同濃度DAPT處理后細胞組作為實驗組，將未處理細胞組作為對照組。
　　5、HCT116細胞進行不同濃度的DAPT處理后1、2、3、4d，分別應用CCK-8法檢測4個時點的OD值，并繪制出細胞生長曲線，觀察對照組和實驗組間細胞增殖變化情況。
　　6、應用流式細胞技術檢測不同濃度DAPT

5、處理后HCT116細胞凋亡情況，比較對照組和實驗組之間的差異。
　　7、采用SPSS19.0及GraphPad Prism5.0統(tǒng)計軟件，對實驗結果進行分析，計量資料以中位數（四分位數）表示，兩組間配對樣本采用非參數檢驗、多組間數據比較采用單因素方差分析，重復測量數據采用雙因素方差分析。繪制各臨床病理資料的Kaplan-Meier生存曲線，采用時序檢驗比較兩條曲線的差異。生存時間為自手術之日起至其死亡或末次隨訪日所經歷的時間，以月

6、為單位計算。采用Cox回歸分析對基因表達和臨床參數進行多因素生存分析，分析影響生存的危險因素，以P＜0.05表示差異存在有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、Notch-1在40例結直腸癌組織中表達量0.0568(0.0302，0.0757)，正常黏膜組織中表達量0.0107(0.0068，0.0231)，可見Notch-1在癌組織中的表達明顯高于正常黏膜組織中的表達(P＜0.0001)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2、No

7、tch-1在腫瘤大于等于5cm表達水平為0.0686(0.0508，0.1321)明顯高于腫瘤小于5cm表達水平0.0500(0.0286，0.0660)(ss=0.0236);Notch-1表達與淋巴結轉移、年齡、性別、浸潤深度無明顯關系，各指標組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　3、HCT116細胞不同濃度DAPT處理后Notch-1表達量出現下降。
　　4、HCT116細胞不同濃度DAPT處理后1、2、3、4d，通

8、過CCK-8法檢測各組細胞增殖情況，結果顯示:10μM DAPT可以明顯抑制結直腸癌細胞的增殖，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0001)。
　　5、HCT116細胞中，實驗組10μM早期凋亡率（2.785±0.4070）％明顯高于對照組（0.2950±0.1530）％，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.0046);實驗組5μM早期凋亡率(0.8250±0.1934)％高于對照組（0.2950±0.1530）％，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.0

9、981);實驗組1μM早期凋亡率（0.6150±0.1472）％高于對照組（0.2950±0.1530）％，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.2063)。
　　6、隨訪生存率，并行單因素發(fā)現結直腸癌患者生存率與淋巴結有無轉移(P=0.0002)及腫瘤侵潤深度(P=0.0137)有關，與性別、年齡、腫瘤大小、Notch-1表達水平無關(P＞0.05)。
　　7、多因素Cox生存分析:Cox多因素生存分析結果顯示影響結直腸癌患者生存率

10、獨立危險因素是淋巴結有無轉移(P=0.003)，未發(fā)現性別、年齡、腫瘤大小、Notch-1表達水平、浸潤深度與結直腸癌患者生存率有明顯相關性(P＞0.05)。
　　結論:
　　1、Notch-1在結直腸癌中高表達，提示其可能對結直腸癌具有癌基因作用。
　　2、Notch-1在大于等于5cm的腫瘤表達水平上調更明顯，提示其可能對判定結直腸癌惡性程度和預后有一定的意義。
　　3、Notch-1可能通過促進結直腸癌細胞