參附注射液及其有效成分人參皂苷Re的減毒作用機(jī)制研究.pdf

1、參附方是臨床常用的經(jīng)典名方，主要由人參、附子兩味藥組成。參附注射由人參和附子的提取物制成，人參有抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、改善心腦血管系統(tǒng)功能和提高機(jī)體免疫力等藥理作用;附片有強(qiáng)心、升壓、抗休克、抗血栓形成、抗缺氧、抗心肌缺血、抗緩慢性心律失常等藥理作用。參附注射液對(duì)于心血管疾病等多個(gè)方面均有良好效應(yīng)，經(jīng)過(guò)古今諸多醫(yī)家的臨證實(shí)踐確證其療效顯著;然而，對(duì)于參附注射液內(nèi)涵的機(jī)制研究卻寥寥無(wú)幾[1-2]。本研究以參附注射液為研究對(duì)象，通過(guò)體內(nèi)外

2、實(shí)驗(yàn)探討參附注射液減毒機(jī)制，為臨床安全、合理用藥提供參考。
　　研究方法:本實(shí)驗(yàn)在動(dòng)物水平采用靜脈注射烏頭堿20μg/kg誘發(fā)大鼠心律失常，觀察參附注射液對(duì)心律失常的影響;實(shí)驗(yàn)分組采用陽(yáng)性對(duì)照胺碘酮組15mg/kg、受試藥人參組0.5g/kg、附片組0.5g/kg、參附組0.75g/kg。隨后從心肌細(xì)胞水平研究參附注射液的減毒作用，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，人參、附片和參附注射液分別單獨(dú)處理心肌細(xì)胞，觀察細(xì)胞存活率、LDH釋放率、原代心肌細(xì)胞

3、搏動(dòng)頻率、Caspase3/7酶活性和細(xì)胞凋亡。利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的PXR-CYP3A4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2工程細(xì)胞株結(jié)合報(bào)告基因技術(shù)，篩選參附注射液中誘導(dǎo)或抑制PXR-CYP3A4通路的化學(xué)成分，并從酶活性水平進(jìn)行確證。最后從心肌細(xì)胞水平研究單體人參皂苷Re及烏頭堿對(duì)CYP酶在mRNA及蛋白水平的影響，同時(shí)檢測(cè)人參皂苷Re對(duì)下游凋亡基因mRNA水平的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1）烏頭堿模型組心率先加快后減慢，參附組和胺碘酮治療組心率均出現(xiàn)

4、顯著性下降，Q-T間期和P-R間期明顯延長(zhǎng)。參附組，人參組和胺碘酮治療組均能推遲房性早搏發(fā)生時(shí)間。2）參附注射液(37，75mg/mL)處理后的H9c2心肌細(xì)胞存活率要高于附片注射液。與附片注射液相比，參附注射液(75mg/mL)處理后的H9c2心肌細(xì)胞LDH釋放率顯著降低。參附注射液(150mg/mL)處理4h時(shí)顯著減輕了附片注射液(100mg/mL)誘導(dǎo)的原代心肌細(xì)胞自發(fā)搏動(dòng)頻率。與附片注射液(12，25mg/mL)相比，參附注射液

5、(18，37mg/mL)有效降低了Caspase3/7酶活性。細(xì)胞凋亡檢測(cè)也同樣表明參附注射液(9，37mg/mL)導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡要小于附片注射液(6，25mg/mL);可為參附注射液減毒提供依據(jù)，但其減毒的深入機(jī)制需進(jìn)一步研究。3）與溶劑對(duì)照組比較，人參皂苷Rc、Rf、 Rb2、Rg2、F2、F1、Re50μmol/L處理30、48和60h時(shí)，誘導(dǎo)倍數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中在藥物濃度200μmol/L組處理48和60

6、 h時(shí)，人參皂苷Rb2、Rg2、F1組誘導(dǎo)倍數(shù)均顯著高于RIF陽(yáng)性對(duì)照組(P＜0.05)。酶活性的研究結(jié)果表明，在48h時(shí)，人參皂苷Rc、Rf、 Rb2、F2、F1可以增加CYP3A4酶活性(P＜0.05)。4)隨著濃度和時(shí)間的增加，人參皂苷Re對(duì)CYP2C11、CYP2J3 mRNA水平均有良好的誘導(dǎo)作用，對(duì)CYP4A1 mRNA水平均有良好的抑制作用;對(duì)CYP4A1蛋白水平也具有良好的抑制作用。人參皂苷Re對(duì)于下游凋亡基因Bcl-2