肺缺血再灌注損傷時HO-1-CO徑路的變化及葛根素對其的影響.pdf

1、目的：探討兔肺缺血再灌注損傷時血紅素加氧酶一1(hemeoxygenase-1，HO-1)／一氧化碳(carbonmonoxide，CO)徑路的變化及葛根素對其的影響。 方法：健康日本大耳白兔70只，隨機分為對照組(C組)、缺血再灌注1小時(IRlh)、3小時(IR3h)、5小時(IR5h)組和葛根素1小時(Purlh)、3小時(Pur3h)、5小時(Pur5h)組。麻醉后左側(cè)開胸，游離肺門，穿過阻斷帶，復(fù)制在體原位單肺缺血再灌

2、注模型。C組左肺門過阻斷帶后不阻斷肺門，觀察6h；IR組左肺門過阻斷帶后阻斷肺門缺血1h，松開阻斷帶分別再灌注1h、3h、5h；Pur組在缺血前5min靜脈給予葛根素(30mg／kg)，余同IR組。各組在缺血前、缺血m、再灌注1h、3h和5h分別抽血檢測一氧化碳血紅蛋白(COHb)濃度，環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量，超氧化物歧化酶(SOD)活力，丙二醛(MDA)含量。實驗結(jié)束時取肺組織檢測濕干重比(W／D)，cGMP含量及HO酶活力；光鏡

3、觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變及計算肺泡損傷率(IQA)；電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)的改變；應(yīng)用免疫組化，原位雜交觀察HO．1表達部位及強度。 結(jié)果：1.IR組血漿COHb濃度、cGMP含量隨著缺血和再灌注時間的延長而逐漸升高；Pur組這種上升趨勢較IR組更加明顯(P<0.01)。 2．IR組血清SOD活力隨著缺血和再灌注時間的延長而逐漸下降；Pur組這種下降的程度較IR組顯著減緩（p<0.01)。 3．IR組、Pur組血清MD

4、A含量均隨著缺血和再灌注時間的延長而逐漸上升，但Pur組上升較IR組緩慢(p<0.01或P<0.05)。 4．與C組相比，IR組、Put組肺組織cGMP含量、HO.1活力均顯著升高（p<0.01)，且隨著再灌注時間的延長而逐漸升高；與同時間點IR組相比，Pur組cGMP含量、HO．1活力明顯增高(P<0.01)。 5．IR組W／D、IQA均明顯高于C組(P<0．01)，且隨著再灌注時間的延長而逐漸升高；Pur組W／D、I

5、QA雖然較C組為高，但明顯低于同時間點IR組(P<0.01)。 6．原位雜交及免疫組化顯示C組HO-1呈陰性表達，IR組、Pur組HO-1在肺血管內(nèi)皮、部分血管平滑肌、外膜層及部分氣道上皮呈陽性表達，且隨著再灌注時間的延長表達逐漸增強；而Pur組HO．1mRNA、HO．1蛋白表達明顯強于同時間點IR組（p<0．01或P<0．05)。 7．光鏡觀察：C組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構(gòu)保持完整，無明顯受損，未見明顯炎性細胞；IR組可見肺間

6、質(zhì)增寬水腫，炎癥細胞浸潤，肺泡內(nèi)可見較多紅細胞滲出，損傷明顯；Put組肺間質(zhì)水腫程度減輕，炎癥細胞浸潤減少，肺泡內(nèi)紅細胞滲出減少，肺泡較完整。 8．電鏡觀察：C組肺血管、肺泡I型、II型上皮結(jié)構(gòu)正常。IR組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)有不同程度的損害。肺血管內(nèi)皮細胞水腫，線粒體空泡化，核染色質(zhì)邊集，核固縮傾向；I型肺泡上皮細胞內(nèi)吞飲小泡較少；II型肺泡上皮細胞表面微絨毛減少，線粒體腫脹，板層小體數(shù)量減少、排空增多，胞漿濃縮，核固縮；肺泡腔內(nèi)水

7、腫、紅細胞增多，肺泡隔及毛細血管內(nèi)炎癥細胞附壁，以中性粒細胞為主。Put組肺組織損傷明顯減輕。肺血管內(nèi)皮細胞輕度腫脹，染色質(zhì)分布較均勻；I型肺泡上皮細胞內(nèi)吞飲小泡較多；II型肺泡上皮細胞表面微絨毛及板層小體增多；肺泡隔輕度水腫，毛細血管內(nèi)炎癥細胞減少。 結(jié)論： 1．肺缺血再灌注可誘導(dǎo)肺組織HO-1的表達。 2．HO．1表達上調(diào)可減輕肺缺血再灌注損傷，其機制可能是通過酶解產(chǎn)物CO激活鳥苷酸環(huán)化酶，提高環(huán)磷酸鳥苷水平