桑葉多糖的分離表征修飾及降血糖活性的研究.pdf

1、桑葉是我國傳統(tǒng)中藥中“藥食同源”的優(yōu)良品種，主要含有黃酮類、多糖類、生物堿類等化合物。其具有多種生物活性及臨床應用，主要用于治療糖尿病，高血壓等病癥。
　　桑葉多糖作為桑葉中重要的一類降血糖成分，得到了國內外學者的高度關注。但是目前有關桑葉多糖的研究，大部分集中在對桑葉多糖的提取、初分離和體內外活性測定方面，鮮有對桑葉多糖的結構研究的報道，尤其是對桑葉多糖中單糖鏈接的方式、構象以及相對分子質量的研究更是少見。本文以桑葉微波輔助水提

2、物為研究對象，采用脫蛋白、脫色、醇沉等粗分離手段和Sephadex凝膠過濾層析的方法分離得到兩種不同相對分子質量段的桑葉純多糖MPL1和MPL2，并采用了GPC、IR、GC及高碘酸氧化和Smith降解等手段，對其結構進行了表征。采用體外α-葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型，研究桑葉多糖對α葡萄糖苷酶活性的抑制作用。最后對桑葉多糖的磷酸化分子修飾進行了初步的研究。
　　1、通過Sephadex凝膠過濾層析，分離純化得到桑葉多糖MPL1和MP

3、L2，并用高效凝膠色譜(HPGPC)和示差檢測器檢測其純度分別為94.55％和96.64％。該方法方法簡便，快捷，可對桑葉多糖的純度進行快速的定性和定量分析，為其結構的表征奠定基礎。
　　2、利用HPGPC與多角度激光光散射檢測器連用分析桑葉多糖兩個組分MPL1和MPL2的重均相對分子質量分別為11800Da和7630Da。利用GC分析MPL1和MPL2是由D-果糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-木糖和D-葡萄糖五種單糖組成，其摩

4、爾比分別為58∶9.9∶5.8∶5.1∶21.2和45∶6.7∶17.2∶7.3∶24.1。而通過經(jīng)典的高碘酸氧化和Smith降解反應的方法得到MPL1和MPL2的主鏈是由1→3位鍵合的糖基組成，支鏈為1→2位鍵合的糖基組成。紅外光譜分析桑葉多糖中存在α構型的C-H吸收峰。獲得了較全面的桑葉多糖的結構信息。
　　3、建立并優(yōu)化了桑葉多糖干熱磷酸化的實驗方法，在最佳工藝為:干熱溫度72℃，加熱時間15h，鹽濃度0.15mol/L，p

5、H4.86的條件下，磷含量可高達12.13％。該方法具有簡單、經(jīng)濟、成本低、不易發(fā)生變性等優(yōu)點。
　　4、通過體外抑制α-葡萄糖苷酶的實驗，測定MPL1和MPL2對蔗糖底物的IC50值分別為89.1μg/mL和70.8μg/mL，對麥芽糖底物的IC50值分別為362μg/mL和422μg/mL。其降血糖活性分別是粗多糖的55倍和69倍。60％經(jīng)過磷酸化修飾后的桑葉多糖比未經(jīng)過修飾的桑葉粗多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制活性都有明顯的提高