Sorcin和HSP27高表達與胃癌多藥耐藥的相關性研究.pdf

1、背景與目的：胃癌多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）是胃癌化療失敗最主要的原因之一，但其分子機制仍然不太清楚。為了尋找新的胃癌耐藥相關的蛋白質(zhì)，本研究前期采用蛋白質(zhì)組學技術比較胃癌細胞株SGC7901與長春新堿誘導的多藥耐藥胃癌細胞株SGC7901/VCR蛋白質(zhì)組的差異，鑒定出24種差異表達的蛋白質(zhì)，其中可溶性耐藥相關性鈣結(jié)合蛋白（soluable resistance-related calcium-bingi

2、ng protein，Sorcin）和熱休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）在多藥耐藥胃癌細胞株SGC7901/VCR中表達明顯上調(diào)。為此，本研究擬在原有工作基礎上，探討Sorcin、HSP27高表達與胃癌細胞多藥耐藥的關系，以明確Sorcin、HSP27在胃癌細胞多藥耐藥產(chǎn)生中的作用和機制，為闡明胃癌多藥耐藥發(fā)生機制提供新線索，為逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥提供新的靶點。 方法： （1）將Sorc

3、in siRNA和對照siRNA分別轉(zhuǎn)染SGC7901/VCR細胞，以及將pcDNA3.0/Sorcin表達質(zhì)粒和空白質(zhì)粒pcDNA3.0分別轉(zhuǎn)染SGC7901細胞，采用Western blotting檢測Sorcin在轉(zhuǎn)染細胞中的表達，確定轉(zhuǎn)染效果； （2）采用MTT和流式細胞儀分別檢測長春新堿對Sorcin轉(zhuǎn)染細胞增殖和凋亡的影響，分析Sorcin表達改變對胃癌細胞化療敏感性的影響； （3）將HSP27反義寡核苷酸或

4、錯義寡核苷酸分別轉(zhuǎn)染SGC7901/VCR，采用Western blotting和免疫細胞化學方法檢測HSP27在轉(zhuǎn)染細胞中的表達，確定轉(zhuǎn)染效果； （4）采用MTT和Hoechest33258熒光染色分別檢測長春新堿對HSP27轉(zhuǎn)染細胞增殖和凋亡的影響，分析HSP27表達下調(diào)對胃癌細胞化療敏感性的影響；（5）免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜技術分離、鑒定SGC7901/VCR細胞中HSP27的相互作用蛋白質(zhì)，并采用免疫共沉淀和Western

5、blotting對部分相互作用蛋白質(zhì)進行驗證，探討HSP27在胃癌多藥耐藥產(chǎn)生中的可能機制。 結(jié)果： （1）上調(diào)Sorcin表達明顯降低SGC7901細胞對長春新堿的敏感性，即活細胞數(shù)增加、凋亡細胞數(shù)減少；而下調(diào)Sorcin表達明顯增強SGC7901/VCR細胞對長春新堿的敏感性，即活細胞數(shù)減少、凋亡細胞數(shù)增加； （2）下調(diào)HSP27表達能明顯增強SGC7901/VCR對長春新堿的化療敏感性，即活細胞數(shù)減少、凋亡

6、細胞數(shù)增加； （3）在SGC7901/VCR細胞中鑒定了25個HSP27的相互作用蛋白質(zhì)。這些HSP27相互作用蛋白質(zhì)按功能分為八類：細胞骨架蛋白質(zhì)、分子伴侶、代謝相關酶類、信號傳導相關蛋白質(zhì)、核糖體蛋白、DAN修復相關蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)錄和翻譯相關蛋白質(zhì)和RNA加工蛋白質(zhì)，它們的功能與報道的HSP27功能相符合。 結(jié)論： （1）Sorcin和HSP27蛋白高表達與胃癌細胞多藥耐藥形成有關，抑制Sorcin和HSP27高