實驗性淋巴瘀滯誘發(fā)胰組織結構及內(nèi)分泌和代謝的變化.pdf

1、器官的正常淋巴回流，對于維持機體內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定，具有重要的功能意義。在大分子物質(zhì)（如胰島素等多肽激素和長鏈脂肪酸）的吸收和轉(zhuǎn)運，炎癥擴散和腫瘤細胞轉(zhuǎn)移等諸多生理及病理過程中，胰腺的淋巴管系統(tǒng)起著極其重要的作用。
　　 如果胰腺的淋巴回流途徑被阻斷，會對胰組織結構和糖脂代謝產(chǎn)生什么樣的影響?目前，尚未見相關的實驗研究報道。
　　 分子生物學和形態(tài)學研究表明，胰淀肽屬于胰島B細胞的正常分泌產(chǎn)物；胰腺內(nèi)出現(xiàn)胰淀肽沉積是2型糖

2、尿病典型的早期病理特征。隨著胰島內(nèi)胰淀肽沉積的加重，胰島細胞的數(shù)量也在逐漸減少；胰島細胞被胰淀肽沉積取代的多少，決定了2型糖尿病的發(fā)展或嚴重程度。胰淀肽為什么會形成淀粉樣蛋白沉積，并進一步影響胰島的內(nèi)分泌功能?在不同的實驗動物中，關于胰淀肽能否形成胰島淀粉樣變，胰淀肽等大分子物質(zhì)的正常轉(zhuǎn)運途徑是直接進入毛細血管，還是通過毛細淋巴管吸收經(jīng)淋巴運輸間接進入血液，淋巴回流受阻是否影響胰島淀粉樣變的因素，仍需深入研究。
　　 本實驗分為

3、四部分，在對大鼠胸導管進行詳細解剖的基礎上，將其胸導管進行選擇性有效結扎，造成淋巴回流阻滯的實驗動物模型，利用組織切片的常規(guī)HE染色和剛果紅染色，免疫組織化學染色方法，對正常和實驗動物的胰腺組織標本，進行光鏡和透射電鏡觀察，探討實驗動物胰腺組織的細微和超微結構變化，觀察胰淀肽在胰島及其周圍的沉積情況；檢測正常和實驗動物的血糖、血脂、胰島素和C.肽的變化。實驗內(nèi)容和結果如下：
　　 第一部分結扎大鼠胸導管誘發(fā)胰淋巴瘀滯模型的建立<

4、br>　　 目的：本實驗擬在對大鼠胸導管進行詳細解剖的基礎上，將其胸導管進行選擇性有效結扎，造成淋巴回流阻滯的實驗動物模型，并通過形態(tài)學觀察進行評價。
　　 方法：選用10月齡SD大鼠20只（由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供），雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，隨機分為兩組，實驗（手術）組和對照（假性手術）組；實驗前30～60分鐘用植物油2～5毫升灌胃，用6％水合氯醛（5ml/kg）腹腔注射麻醉，在手術顯微鏡下，假性手術組只充分游離胸導管而不

5、結扎。手術組在充分暴露胸導管的基礎上，于腹部膈腳下將其結扎。選擇在腹部對大鼠胸導管起始部，進行結扎造模，以減少結扎副作用和提高造模成功率。術后的實驗動物，常規(guī)喂養(yǎng)。造模術后6個月的實驗動物，在6％水合氯醛（5ml/kg）腹腔注射深度麻醉下，快速切取大鼠胰組織標本，部分胰腺標本行石蠟包埋和組織切片，行常規(guī)HE和剛果紅染色或免疫組織化學染色后光鏡觀察。
　　 結果：
　　 1.大鼠胰組織切片HE染色光鏡觀察顯示，實驗組與對照

6、組相比，胰腺小葉間隙顯著增寬，出現(xiàn)明顯的淋巴管擴張、結締組織增生和脂肪堆積。
　　 2.實驗組術后動物剛果紅染色切片的光鏡觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 結論：實驗動物胰組織結構的形態(tài)學變化提示，胸導管結扎可導致胰淋巴引流障礙，引起胰淋巴管擴張、結締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等。采用腹部結扎大鼠胸導管的手術方法，可以建立胰淋巴瘀滯的動物模型，為進一步探討實驗性淋巴瘀滯

7、對胰組織細微和超微結構、以及對內(nèi)分泌和代謝的影響奠定了基礎。
　　 第二部分結扎大鼠胸導管誘發(fā)胰組織結構變化和胰淀肽沉積的形態(tài)學觀察
　　 目的：胰淀肽是由37個氨基酸組成的多肽，屬于胰島B細胞的正常分泌產(chǎn)物，并與胰島素共同貯存于B細胞的分泌顆粒內(nèi)，胰淀肽沉積是2型糖尿病典型的早期病理特征，并隨年齡的增長而增多。通過腹部結扎大鼠胸導管，建立胰淋巴瘀滯動物模型，觀察實驗動物胰組織結構變化和胰淀肽沉積情況，探討淋巴瘀滯對胰組

8、織細微和超微結構的影響。
　　 方法：10月齡大鼠20只，隨機分為兩組，實驗（手術）組和對照（假性手術）組；造模后6個月取材，部分胰組織做石蠟包埋切片，HE和剛果紅染色；部分組織切片做免疫組織化學染色和光鏡觀察。
　　 結果：
　　 1.實驗組大鼠胰組織切片HE染色光鏡觀察顯示，胰腺小葉間隙顯著增寬，出現(xiàn)明顯的淋巴管擴張、結締組織增生和脂肪堆積，胰島明顯可見呈淡染。
　　 2.術后動物剛果紅染色切片的光鏡

9、觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 3.胰淀肽免疫組織化學染色切片的光鏡觀察表明，在術后動物的胰島及其周圍，呈現(xiàn)胰淀肽免疫反應強陽性棕褐色著色反應。
　　 結論：實驗動物胰組織結構的形態(tài)學變化提示，胸導管結扎可導致胰淋巴引流障礙，引起胰淋巴管擴張、結締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等，結扎大鼠胸導管所致的結構變化順序為脂肪變在先，淀粉樣變在后，這些結構變化會進一步影響胰島的內(nèi)

10、分泌功能。
　　 第三部分結扎大鼠胸導管對胰組織結構變化及胰島激素和糖代謝的影響
　　 目的：在生理情況下，胰島素由B細胞分泌入組織間隙后，可以進入胰島周圍的淋巴管，通過淋巴進行轉(zhuǎn)運，胰腺的淋巴系統(tǒng)，是胰島素正常轉(zhuǎn)運的一條重要途徑。但是，如果這條途徑被阻斷，會不會對實驗動物的糖代謝產(chǎn)生影響?目前，尚未見相關的實驗研究報道。本實驗采用腹部結扎大鼠胸導管，建立胰淋巴瘀滯動物模型，觀察術后實驗動物胰組織結構變化和胰淀肽沉積情況

11、，探討實驗性淋巴瘀滯對大鼠胰島激素及糖代謝的影響。
　　 方法：30只10月齡SD大鼠隨機分為兩組，實驗（手術）組15只和對照（假性手術）組15只；造模后6個月取材，部分胰腺標本行石蠟包埋和組織切片，行常規(guī)HE和剛果紅染色后光鏡觀察；部分標本做冰凍切片，進行免疫組織化學染色和光鏡觀察；部分標本進行透射電鏡樣品制備和觀察。并于胸導管結扎前后及實驗動物處死前，分別取靜脈血檢測空腹血糖、胰島素及C一肽，其中血糖做結扎前后的自身對照差異

12、檢驗，胰島素和C-肽做實驗組和對照組的組間差異檢驗。
　　 結果：
　　 1.胰淀肽免疫組織化學染色切片的光鏡觀察表明，在術后動物的胰島及其周圍，呈現(xiàn)胰淀肽免疫反應強陽性棕褐色著色反應。
　　 2.術后動物剛果紅染色切片的光鏡觀察提示，胰腺小葉組織間隙明顯增寬，胰島表現(xiàn)為朱紅色剛果紅著色現(xiàn)象。
　　 3.超薄切片透射電鏡觀察顯示，胰腺小葉間隙增寬，可見血管和擴大的淋巴管；胰島細胞間隙增寬，細胞間隙內(nèi)可見大

13、量脂滴樣物質(zhì)和膠原原纖維樣結構。此外，在增寬的胰組織間隙內(nèi)，胰島細胞間隙增寬，甚至擴大形成管狀或池狀；除有明顯的脂類物質(zhì)堆積，還?？梢姷揭绯鲅芡庥蛛y以被吸收的紅細胞；可見分泌顆粒大小和電子密度不同的胰島細胞，在胰島B細胞內(nèi)，有些分泌顆粒的暈環(huán)明顯增寬；有些胰島細胞的核，其核膜變得模糊不清，出現(xiàn)核染色質(zhì)邊集甚至核固縮，呈似細胞凋亡現(xiàn)象。
　　 4.胸導管結扎組大鼠術后血糖升高，與術前基礎值相比，差異具有顯著性；術后結扎組空腹血清

14、胰島素水平下降，與假手術對照組相比差異顯著，C.肽變化不明顯，組間差異不具有顯著性。
　　 結論：術后實驗組動物的血糖水平明顯增高，排除手術過程的應激影響，手術組血糖水平較術前明顯增高，推測結扎實驗動物胸導管可導致胰淋巴引流障礙，脂肪堆積以及胰淀肽沉積等，胰島細胞功能受損，部分胰島細胞凋亡，胰島激素轉(zhuǎn)運受阻，血中胰島素濃度下降，并進一步影響實驗動物的糖代謝，導致血糖升高。
　　 第四部分結扎大鼠胸導管對脂質(zhì)代謝和胰組織結

15、構的影響
　　 目的：探討胸導管結扎對脂質(zhì)代謝的影響，揭示淋巴回流障礙誘發(fā)胰組織的細微和超微結構變化。
　　 方法：選用10月齡SD大鼠30只，隨機分為假手術對照（10只）組和結扎胸導管模型（20只）組，建立淋巴瘀滯動物模型。術后6個月取靜脈血標本進行血脂檢測；部分胰組織標本做石蠟包埋切片，HE和剛果紅染色光鏡觀察；部分胰組織進行透射電鏡樣品制備和觀察。
　　 結果：
　　 1.與對照組相比，胸導管結扎模

16、型組大鼠游離脂肪酸濃度明顯下降，甘油三酯濃度也下降，然而，膽固醇濃度無顯著變化。
　　 2.常規(guī)HE和剛果紅染色切片光鏡觀察顯示，模型組大鼠的胰腺小葉間隙增寬，淋巴管擴張，呈明顯的結締組織增生和脂肪堆積。
　　 3.超薄切片透射電鏡觀察顯示，模型組大鼠的胰島細胞間隙增寬，細胞間隙內(nèi)可見大量脂滴樣物質(zhì)、紅細胞和膠原原纖維樣結構。
　　 結論：胸導管結扎可引起胰淋巴回流障礙和脂質(zhì)代謝紊亂，導致胰腺組織間隙增寬、脂肪堆

17、積、胰島細胞內(nèi)大量脂滴出現(xiàn)等，這些結構變化可能影響胰的內(nèi)、外分泌功能。
　　 對大鼠胸導管起始部進行選擇性有效結扎后，肉眼可見乳糜池明顯充盈，乳白色腸系膜淋巴管充分顯現(xiàn)，成功建立了淋巴回流阻滯的實驗動物模型；術后半年取胰組織標本光鏡觀察顯示，胰腺內(nèi)出現(xiàn)淋巴管擴張、結締組織間隙增寬、脂肪堆積以及胰淀肽沉積等形態(tài)學變化；實驗組胰組織透射電鏡樣品觀察提示胰島細胞間隙增寬，細胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，胰島B細胞分泌顆粒擴大、暈環(huán)增寬等超微結構改