淫羊藿苷對成骨細胞BMP-2表達影響的實驗研究.pdf

1、淫羊藿苷(icariin，ICA)是淫羊藿主要有效成分之一?，F(xiàn)代中藥藥理學認為淫羊藿具有補腎壯陽，益精健骨的功效，主要化學成分為黃酮類化合物，包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷、脫水淫羊藿素等。轉移生長因子(transforming growth factor，TGF)超家族對成骨細胞的形態(tài)學發(fā)生、增殖、分化和凋亡中起重要作用，骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins，BMP)是轉化生長因子-β(TGF-β)超家族中的一

2、組多功能細胞因子，具有誘導間充質細胞遷徙、增殖、分化，最終導致軟骨、骨形成的作用，在體內和體外實驗都證明BMP-2有很強的促進成骨細胞分化和誘導體外成骨的能力．本實驗探討淫羊藿苷對成骨細胞BMP-2表達的影響，為淫羊藿苷促進成骨細胞生長提供實驗依據(jù)，并為淫羊藿苷用于骨科臨床調節(jié)成骨細胞的功能提供理論依據(jù)。 目的：檢測淫羊藿苷對體外培養(yǎng)的成骨細胞MC3T3-E1中BMP-2表達影響。 方法：MC3T3-E1細胞分成4組培養(yǎng)

3、，用0、10、20、40ng/ml不同濃度的淫羊藿苷刺激MC3T3-E1細胞。用倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況；通過四甲基噻唑藍(MTT)法測繪細胞生長曲線及流式細胞檢測儀測定細胞生長周期，描述MC3T3-E1細胞在淫羊藿苷刺激下的增值能力；通過細胞免疫化學染色和Western bloting對MC3T3-E1細胞BMP-2蛋白表達進行測定． 結果： 1、在淫羊藿苷刺激下，MC3T3-E1細胞呈多角形，緊密全層排列，胞漿

4、豐富，染色質松散，符合成骨細胞特點； 2、10，20ng/ml濃度淫羊藿苷可使MC3T3-E1細胞的生長曲線明顯上移，方差分析顯示10、20ng/ml組MTT OD值較0、40ng/ml組有顯著性差異(P<0.01)；10、20、40ng/ml可使MC3T3-E1S期細胞百分率升高，G1期細胞百分率減少，其中10ng/ml組、20ng/ml組作用更為顯著，各組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)； 3、熒光顯微鏡下可見

5、DAPI標記的MC3T3-E1細胞核呈藍色熒光，而免疫細胞化學染色BMP-2蛋白的表達呈現(xiàn)出綠色熒光，對照組和各試驗組免疫化學染色均為陽性，其陽性表達分布在胞漿內，10ng/ml組、20ng/ml組陽性細胞數(shù)較0ng/ml組、40ng/ml組明顯增多，熒光強度增強； 4、在31KD各試驗組均出現(xiàn)目標條帶表達，其中10ng/ml組、20ng/ml組MC3T3-E1細胞BMP-2蛋白量隨ICA濃度的增加而增加，呈劑量依賴性特點；40

6、ng/ml組BMP-2蛋白表達量較對照組略有增加，但與10ng/ml組、20ng/ml組比較反而降低。 結論： 1、細胞生長曲線明顯上移和細胞生長周期S期細胞百分率升高，G1期細胞百分率減少提示淫羊藿苷可以促進成骨細胞MC3T3-E1增殖； 2、通過細胞免疫化學染色和Western bloting對MC3T3-E1細胞BMP-2蛋白表達進行檢測，各實驗組陽性表達與對照組比較明顯增強提示淫羊藿苷可以增加成骨細胞BM