燥濕消痰散結(jié)方對(duì)濕邪干預(yù)S-,180-荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用及機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文通過(guò)模擬濕邪環(huán)境，采用燥濕消痰散結(jié)方進(jìn)行治療，運(yùn)用放免法和免疫組化方法，從蛋白水平出發(fā)，觀察燥濕消痰散結(jié)方對(duì)濕邪干預(yù)S<,180>荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤組織中TNF-α、IL-8、ICAM-1、VEGF蛋白表達(dá)的影響，探討濕邪在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中的作用及其機(jī)理；探討燥濕消痰散結(jié)方對(duì)濕邪干預(yù)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用及其機(jī)理。 目的： 1．觀察濕邪對(duì)S<,180>荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤組織中TNF-α、IL-8、ICAM-1、VE

2、GF蛋白表達(dá)的影響，探討濕邪在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中的作用及其機(jī)理； 2．觀察燥濕消痰散結(jié)方對(duì)濕邪干預(yù)S<,180>荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤組織中TNF-α、IL-8、ICAM-1、VEGF蛋白表達(dá)的影響，探討燥濕消痰散結(jié)方對(duì)濕邪干預(yù)S<,180>荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的作用及其機(jī)理。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)第一部分：昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、單純種瘤組、單純濕邪組、濕邪加種瘤組，共4組，每組10只雌雄各半。正常對(duì)照組：將

3、小鼠放置于氣溫10～25℃，相對(duì)濕度40～70％的環(huán)境中正常飼養(yǎng)，不施加任何刺激因素。單純種瘤組：第8天在小鼠右前腋下接種0.2ml(密度為1×10<'7>ml<'-1>)S<,180>腹水瘤溶液。單純濕邪組：將小鼠放置于特制木箱(氣溫30～32℃，相對(duì)濕度85％～95％)中，上午灌胃液化豬脂肪每只0.4ml，下午灌胃生地液每只0.4ml。第8天后隔天灌胃液化豬脂肪、生地液，量減半。濕邪加種瘤組：第1-7天同單純濕邪組，第8天開(kāi)始接種瘤

4、株，以后隔天灌胃液化豬脂肪和生地液，量減半。定期觀察動(dòng)物一般狀況和體重變化情況。4周后摘小鼠眼球取血，放免法檢測(cè)血清胃泌素含量，參照文獻(xiàn)檢測(cè)小鼠尿D-木糖含量。麻醉后脊椎脫臼法處死全部小鼠，剖取瘤體稱(chēng)重，計(jì)算腫瘤增長(zhǎng)率。取單純種瘤組和濕邪加種瘤組小鼠腫瘤組織，運(yùn)用免疫組化EnVision法檢測(cè)腫瘤組織中TNF-α、ICAM-1、VEGF蛋白表達(dá)；運(yùn)用ELISA法測(cè)定IL-8蛋白含量。 2.實(shí)驗(yàn)第二部分：昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為

5、生理鹽水組、喃氟啶組、消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組，共4組，每組10只雌雄各半。每組均按照濕邪加種瘤組方法(干預(yù))造模。4組均在接種瘤株48h后給藥。給藥方式均為灌胃。給藥方案為：生理鹽水組：生理鹽水每只每天0.4ml；喃氟啶組：喃氟啶稀釋液每只每天0.4ml；消痰散結(jié)組：消痰散結(jié)方每只每天0.4ml；燥濕消痰散結(jié)組：燥濕消痰散結(jié)方每只每天0.4ml。定期觀察小鼠生存狀態(tài)變化和腫塊變化的情況。4周后麻醉，脊椎脫臼法處死全部小鼠，剖取瘤體稱(chēng)

6、重，計(jì)算抑瘤率。取各組小鼠腫瘤組織，運(yùn)用免疫組化EnVision法檢測(cè)腫瘤組織中TNF-α、ICAM-1、VEGF蛋白表達(dá)；運(yùn)用ELISA法測(cè)定IL-8蛋白含量。 結(jié)果： 第一部分： 1.單純濕邪組、濕邪加種瘤組小鼠在濕邪干預(yù)第11d后，均不同程度地出現(xiàn)不欲飲食、不欲飲水、懶動(dòng)、嗜睡、便溏等類(lèi)似臨床濕阻癥候的表現(xiàn)。兩組小鼠尿D-木糖含量分別為2.809±1.208mg、2.597±1.109mg，與正常對(duì)照組(4

7、.743±1.073mg)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。兩組小鼠血清胃泌素含量分別為 14.410±2.617pg·ml<'-1>、 15.609±2.046pg·ml<'-1>，與正常對(duì)照組(25.485±3.073pg·ml<'-1>)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。 2.濕邪加種瘤組小鼠腫塊出現(xiàn)時(shí)間為4.4±0.6天，與單純種瘤組(7.8±0.5天)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)；濕邪加種瘤組小鼠瘤重為3.0

8、82±0.232g，與單純種瘤組(1.742±0.156g)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。 3.單純種瘤組與濕邪加種瘤組，2組TNF-α陽(yáng)性表達(dá)率分別為69％、78％，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；2組IL-8蛋白含量分別為33.300±4.387pg·ml<'-1>、34.410±7.692pg·ml<'-1>，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)：2組ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)率分別為52％、78％，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)

9、；2組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為57％、76％，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。 第二部分： 1.四組中，喃氟啶組小鼠生存狀態(tài)最差，濕阻癥狀明顯，瘤塊增長(zhǎng)迅速。消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組小鼠濕阻癥狀均有所緩解，瘤塊增長(zhǎng)緩慢，其中燥濕消痰散結(jié)組小鼠濕阻癥狀改善最為明顯。 2.喃氟啶組、消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組小鼠瘤重分別為1.532±0.349g、1.433±0.358g、1.304±0.347g，與生理鹽水組(3

10、.162±0.269g)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，但三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。從抑瘤率上看，三組的抑瘤率分別為51.55％、54.68％、58.76％，燥濕消痰散結(jié)方高于消痰散結(jié)方，消痰散結(jié)方高于喃氟啶。 3.喃氟啶組、消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組，3組小鼠腫瘤組織中TNF-α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為32％、28％、24％，與生理鹽水組(78％)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，但三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05

11、)。消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組，2組小鼠腫瘤組織中IL-8蛋白含量分別為27.988±5.508pg·ml<'-1>、27.968±1.783pg·ml<'-1>，與生理鹽水組(34.410±7.692 pg·ml<'-1>)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。喃氟啶組(34.300±4.387pg·ml<'-1>)與生理鹽水組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。消痰散結(jié)組和燥濕消痰散結(jié)組，2組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。喃氟啶組、

12、消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組，3組小鼠腫瘤組織中ICAM-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為54％、30％、12％，與生理鹽水組(78％)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，消痰散結(jié)組與燥濕消痰散結(jié)組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。喃氟啶組、消痰散結(jié)組、燥濕消痰散結(jié)組，3組小鼠腫瘤組織中VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為50％、31％、13％，與生理鹽水組(76％)比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，消痰散結(jié)組與燥濕消痰散結(jié)組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0

13、.05)。 結(jié)論： 1.濕邪干預(yù)后，小鼠出現(xiàn)濕阻癥狀，尿D-木糖含量和血清胃泌素含量均低于正常對(duì)照組，證明濕邪干預(yù)小鼠模型建立成功。 2.濕邪干預(yù)后，小鼠腫塊出現(xiàn)的時(shí)間提前，小鼠瘤重增加，提示濕邪可以促進(jìn)S180荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)。 3.濕邪干預(yù)后，小鼠腫瘤組織中ICAM-1、VEGF蛋白表達(dá)增強(qiáng)，IL-8蛋白含量增高，提示濕邪促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)理可能與上調(diào)ICAM-1、VEGF蛋白的表達(dá)和增加IL-8