RNA干擾抑制大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的TRPV4表達(dá)與功能.pdf

1、目的：建立大鼠背根神經(jīng)節(jié)（Dorsal root ganglion，DRG）細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型，觀察在SiRNA轉(zhuǎn)染下培養(yǎng)24h和48h的神經(jīng)元形態(tài)和活性的變化，篩選這種神經(jīng)元siRNA轉(zhuǎn)染的濃度。 方法：取新生Wistar大鼠腰背段全部DRG；將處理好的DRG神經(jīng)元進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)時(shí)間，將神經(jīng)元隨機(jī)分為正常對(duì)照組、SiRNA不同濃度組、在SiRNA中培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后觀察各組神經(jīng)元在熒光顯微鏡的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，并用MTT法分析各組神經(jīng)

2、元細(xì)胞生長(zhǎng)活性的改變。另外采用 結(jié)果：熒光顯微鏡下觀察SiRNA轉(zhuǎn)染培養(yǎng)組DRG神經(jīng)元形態(tài)較正常組五無明顯差異。MTT法比較10-40nM各組神經(jīng)元活性的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用FLUO3熒光探針，觀察SiRNAa作用下細(xì)胞內(nèi)游離鈣對(duì)低滲溶液的反應(yīng)，采用ELISA方法觀察KCL刺激下各組細(xì)胞釋放P物質(zhì)的改變， 結(jié)論：40-80nMSiRNA可以有效轉(zhuǎn)染DRG細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣對(duì)低滲溶液的反應(yīng)產(chǎn)生影響，并且對(duì)釋放P物質(zhì)也