Sonic hedgehog (Shh)對(duì)大鼠永久性腦缺血的潛在治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究Shh蛋白對(duì)大鼠永久性腦缺血模型的保護(hù)作用及其潛在機(jī)制。
　　方法:原代大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞1-2代后,應(yīng)用糖氧剝奪模擬體外缺血模型,分別給予rHu Shh、Cyclopamine預(yù)處理,選取2小時(shí)、4小時(shí)或6小時(shí)三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)為檢測(cè)終點(diǎn),用MTT法或 BrdU染色法檢測(cè)細(xì)胞存活和細(xì)胞增殖;建立大鼠永久性腦缺血模型,側(cè)腦室注射rHu Shh或PBS,觀察神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,應(yīng)用TTC法檢測(cè)腦梗塞面積,干濕稱(chēng)重法檢測(cè)腦水腫,依

2、文思藍(lán)外滲法檢測(cè)血腦屏障通透性,激光散斑襯比技術(shù)檢測(cè)皮層血流灌注,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)缺血梗塞區(qū)邊緣CD31和α-SMA的陽(yáng)性表達(dá),用CD31和Ki-67兩種抗體進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo),用共聚焦顯微鏡觀察缺血梗塞區(qū)邊緣內(nèi)皮細(xì)胞增殖狀況。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)Sonic hedgehog(Shh)信號(hào)通路中的關(guān)鍵成份(Shh,Patched-1,Gli-1)及血管新生因子(VEGF、Ang-1和Ang-2)的mRNA水平,用免疫印跡法(

3、Western blotting)檢測(cè)上述因子的蛋白水平。
　　結(jié)果:1)rHu Shh可促進(jìn)OGD處理下原代培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活和增殖能力;2)大鼠永久性腦缺血模型后24小時(shí)可見(jiàn)腦組織Shh,Patched-1,Gli-1的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)增高,而側(cè)腦室給予rHu Shh可以進(jìn)一步提高Patched-1的蛋白表達(dá)水平;3)側(cè)腦室給予rHu Shh可以顯著減輕腦缺血導(dǎo)致的神經(jīng)功能缺損,降低梗塞面積,減輕腦水腫,

4、改善血腦屏障通透性,提高皮層血流灌注;4)側(cè)腦室給予rHu Shh可以增加缺血梗塞區(qū)邊緣CD31和α-SMA陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞,增加CD31和Ki-67共定位的陽(yáng)性細(xì)胞;5)側(cè)腦室給予rHu Shh,在大鼠永久性腦缺血模型后24小時(shí)的腦組織可見(jiàn)VEGF和Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)增高。
　　結(jié)論:Shh對(duì)缺血損傷的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用;腦缺血后Shh信號(hào)通路存在激活;外源性給予Shh可調(diào)控血管新生因子的表達(dá),促進(jìn)