反式白藜蘆醇及白藜蘆醇苷在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究.pdf

1、1、血漿中反式白藜蘆醇(t-Res)及反式白藜蘆醇苷(t-PD)的高效液相色譜法(HPLC)建立及其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究 目的：建立大鼠血漿中t-Res及t-PD濃度的HPLC測定方法，研究比較t-Res及t-PD在大鼠體內(nèi)的藥代動力學行為。 方法：取Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為3組，每組65只，根據(jù)大鼠灌胃給予t-Res(29.2、58.5、116.9mg·kg-1)后，在預定時間點(給藥前及

2、給藥后0.083、0.167、0.25、0.333、0.417、0.5、0.667、0.833、1、1.5、2、2.5h)眼眶取血，分離血漿，微孔濾膜濾過，20μl進樣。色譜柱為HypersilBDSC18柱(200mm×4.0mm,5μm)；流動相：乙腈-1％冰醋酸溶液(25∶75)；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：306nm。記錄峰面積，按外標法以峰面積計算血藥濃度，采用DAS2.0藥代動力學程序軟件分析藥物濃度－時間(C-

3、T)曲線，進行自動擬合處理，選擇最佳房室模型參數(shù)，并給出非房室模型(統(tǒng)計矩)參數(shù)。 大鼠灌胃給予t-PD的劑量分別為50mg·kg-1、100mg·kg-1、200mg·kg-1，樣品前處理方法同前，流動相：乙腈-1％冰醋酸溶液(22∶78)；流速：0.8ml·min-1；檢測波長：306nm。 結果：大鼠血漿中t-Res在0.125～2.5μg·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好，回歸方程為A=0.4708+25.5397C(

4、n=6)，相關系數(shù)0.9994；大鼠血漿中t-PD在0.013～2.525μg·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好，回歸方程為R=4.2650+17.5689C(n=7)，相關系數(shù)0.9998。血漿中t-Res的最低檢測濃度為0.0625μg·ml-1，t-PD最低檢測濃度為0.006μg·ml-1。t-Res在高、中、低三種濃度的回收率分別是104.26％、99.45％、96.35％(n=5)；t-PD在高、中、低三種濃度的回收率分別是98.

5、83％、102.21％、95.42％(n=5)。i.g.給藥的C-T曲線數(shù)學模型較為復雜，因此同時采用非房室模型進行擬合。在等摩爾劑量給藥條件下，反式白藜蘆醇原形藥物進入體內(nèi)摩爾總量(AUCt-Res)大于反式白藜蘆醇苷原形藥物(AUCt-PD)。 結論：采用本文建立的生物樣品預處理方法和HPLC法研究SD大鼠灌胃t-Res或t-PD后的藥代動力學過程，生物樣品預處理方法回收率高，色譜分離選擇性好。本法的準確度、精密度、靈敏度、

6、專屬性和定量線性范圍均達到體內(nèi)藥物分析的要求。t-Res與t-PD灌胃給藥后，吸收迅速，血藥濃度消除較快，個體差異較大。 2、t-Res及t-PD對大鼠肝微粒體P450酶系的影響 目的：研究比較t-Res及t-PD對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶系的影響。 方法：等摩爾的t-Res(116.9mg·kg-1)及t-PD(200mg·kg-1)灌胃給藥SD大鼠，空白組給予等容量的1％羧甲基纖維素鈉，每日1次，14天

7、后，斷頭處死，用鈣沉淀法制備大鼠肝微粒體，用考馬斯亮藍法測定蛋白濃度，采用紫外和熒光分光光度計的方法建立肝微粒體中細胞色素P450、氨基比林N-脫甲基酶、紅霉素N-脫甲基酶和7-乙氧基-3-異吩噁唑酮脫烴酶的檢測方法，并檢測其活性。用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析統(tǒng)計。 結果：測定氨基比林-N-脫甲基酶、紅霉素N-脫甲基酶活性的甲醛標準曲線，在0.05～0.5mmol·L-1濃度范圍內(nèi)與OD值有良好的線性關系，最低檢測限

8、為0.05mmol·L-1。線性方程為y=2.2768x+0.0015(r=0.9977，n=6)。測定7-乙氧基-3-異吩噁唑酮脫烴酶的resorufin標準曲線方程為y=1.9962x+1.4741(r=0.9997，n=6)。檢測范圍為10～200mmol·L-1，最低檢測限為10mmol·L-1。t-Res組及t-PD組對細胞色素P450、氨基比林N-脫甲基酶、紅霉素-N-脫甲基酶和7-乙氧基-3-異吩噁唑酮脫烴酶的活性有顯著性