TR3在應激損傷心肌細胞中分布的變化及其生物學機制.pdf

1、目的：觀察應激條件下心肌細胞中TR3的表達和亞細胞定位的變化，研究這種變化的生物學機制，為揭示應激機體心肌損傷的病理學機理提供科學依據(jù)。 方法：建立心肌細胞應激損傷的整體動物模型和離體細胞模型；采用westemblotting方法和細胞免疫熒光法觀察TR3在應激心肌細胞中的亞細胞定位；采用熒光探針流動透析裝置測定整體動物心肌細胞線粒體靜息態(tài)和能化態(tài)的跨膜電位差；采用流式細胞術(shù)觀察離體心肌細胞的凋亡率和線粒體膜電位；采用weste

2、mblotting法測定應激心肌細胞中細胞色素C在胞漿和線粒體中的含量；構(gòu)建TR3缺失突變體與GFP的融合表達載體并導入心肌細胞，尋找應激心肌細胞中TR3線粒體轉(zhuǎn)位的必需氨基酸序列；采用免疫沉淀法檢測應激狀態(tài)下心肌細胞中TR3的絲氨酸磷酸化水平，研究其與TR3在心肌細胞內(nèi)分布的相關(guān)性。 結(jié)果：應激機體心肌細胞線粒體中TR3蛋白含量顯著升高，TR3發(fā)生向線粒體的轉(zhuǎn)位；加入核輸出抑制劑LMB后，TR3的核輸出受到阻抑，應激心肌細胞中

3、TR3滯留于胞核，不發(fā)生向線粒體的轉(zhuǎn)位。應激條件下TR3向線粒體的轉(zhuǎn)位促進心肌細胞線粒體膜滲透性轉(zhuǎn)換孔開放、線粒體細胞色素C釋放及心肌細胞凋亡；加入LMB阻抑TR3的核輸出后，應激心肌細胞中線粒體膜滲透性轉(zhuǎn)換孔開放、線粒體細胞色素C釋放及心肌細胞凋亡均受到阻抑。TR3N端的152個氨基酸對應激心肌細胞中TR3發(fā)生線粒體轉(zhuǎn)位進而導致細胞凋亡發(fā)揮重要作用。應激狀態(tài)下，糖皮質(zhì)激素通過激活PKA通路，導致TR3絲氨酸磷酸化水平的升高進而使TR3

4、發(fā)生線粒體轉(zhuǎn)位，從而引發(fā)心肌細胞線粒體膜滲透性轉(zhuǎn)換孔開放、線粒體細胞色素C釋放及心肌細胞凋亡等生物學作用；加入H．89阻抑PKA通路后，應激心肌細胞中TR3的絲氨酸磷酸化水平降低，TR3的線粒體轉(zhuǎn)位被阻斷，線粒體膜滲透性轉(zhuǎn)換孔開放、線粒體細胞色素C釋放及心肌細胞凋亡均受到阻抑。 結(jié)論：應激誘導心肌細胞中TR3向線粒體轉(zhuǎn)移，并繼而活化細胞凋亡的線粒體通路，引起心肌細胞凋亡。TR3N端的152個氨基酸是應激心肌細胞中TR3發(fā)生線粒體