微囊化兔雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)及相關(guān)研究.pdf

1、目的：探討從成年大白兔周圍神經(jīng)分離、純化、培養(yǎng)獲取大量雪旺細(xì)胞的有效手段，觀察微囊化兔雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中的形態(tài)與增殖特征，為神經(jīng)損傷后修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：利用成年兔發(fā)生Wallerian變性的雙側(cè)坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后反復(fù)差速貼附法進(jìn)行培養(yǎng)，快速分離純化雪旺細(xì)胞，通過(guò)相差顯微鏡下觀察雪旺細(xì)胞狀態(tài)計(jì)數(shù)和S-100細(xì)胞免疫組化染色相結(jié)合鑒定，觀察其生長(zhǎng)并繪制生長(zhǎng)曲線，按照細(xì)胞倍增時(shí)間公式計(jì)算其倍增時(shí)間。隨后，海藻酸鈉．氯化鋇一

2、步成囊法包裹生長(zhǎng)良好的第三代雪旺細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察，運(yùn)用MTI、法測(cè)定微囊包裹的雪旺細(xì)胞和單純雪旺細(xì)胞的增殖反應(yīng)。 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)利用發(fā)生Wallerian變性后的兔雙側(cè)坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后差速貼壁培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，獲得大量雪旺細(xì)胞，經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定，雪旺細(xì)胞純度達(dá)95％以上，細(xì)胞數(shù)量達(dá)1×10<'6>／ml以上：繪制其生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算得出體外培養(yǎng)的第三代雪旺細(xì)胞體外倍增時(shí)間為3d：MTT。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：經(jīng)