CC亞族趨化因子受體6基因敲除對AppE---小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的影響.pdf

1、目的：心血管疾病已經成為威脅人類生命和健康的最常見疾病，也是全球關注的一大公共衛(wèi)生問題，而動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)則是這類疾病發(fā)生、發(fā)展的一個重要病理學基礎。研究證明趨化因子及其受體是參與動脈粥樣硬化病程進展的關鍵因素，其在炎癥細胞活化，進而遷入內膜和促進斑塊形成的過程中扮演著至關重要的角色。CC亞族趨化因子受體6(CC chemokine receptor6，CCR6)是一種兼具有炎癥和穩(wěn)態(tài)功能的趨化因子受

2、體類型，可以廣泛表達于單核巨噬細胞、中性粒細胞等多種白細胞的亞型。其中巨噬細胞可大量吞噬氧化型低密度脂蛋白，并轉化為巨噬細胞源性的泡沫細胞，進而促進了AS內膜斑塊的形成和發(fā)展。并且研究表明，單核-巨噬細胞表達的單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)也參與了炎癥過程和粥樣硬化的進展。對于未被激活的單核巨噬細胞和中性粒細胞來說，CCR6的表達是低水平的，但是在動脈粥樣硬化相關細胞因子

3、的刺激下CCR6的表達水平將迅速升高。因此，我們推測CCR6對于AS斑塊的形成、發(fā)展有重要影響。我們將借助CCR6基因敲除的ApoE-/-小鼠模型，進一步探討CCR6對動脈粥樣硬化的影響及其作用機制。
　　方法：⑴體外實驗:培養(yǎng)巨噬細胞系RAW264.7細胞（小鼠來源），并應用構建成功的CCR6 siRNA干擾巨噬細胞的CCR6表達。然后通過噻唑藍比色實驗(MTT實驗)及細胞遷移(Transwell)實驗，進一步觀察CCR6對RA

4、W264.7巨噬細胞增殖能力和遷移能力的影響;Western blotting檢測巨噬細胞MCP-1表達。⑵動物實驗:雜交培育的雙敲CCR6-/-ApoE-/-小鼠作為實驗組(n=20只)，普通的單敲ApoE-/-小鼠作為對照組(n=20只)，給予高脂飲食飼養(yǎng)。12周后處死兩組小鼠，然后主動脈根部快速取材固定，并制作冰凍切片，進行HE染色觀察粥樣斑塊面積，利用油紅O染色觀察粥樣斑塊內脂質成分含量，并行免疫組化染色測定斑塊內單核-巨噬細胞

5、標志物(MOMA-2)和MCP-1的表達水平。
　　結果：①應用構建成功的CCR6 siRNA干擾RAW264.7巨噬細胞的CCR6表達后，巨噬細胞的增殖能力及遷移能力明顯減弱(P＜0.05)。②與普通ApoE-/-小鼠（對照組）比較，CCR6-/-ApoE-/-小鼠（實驗組）粥樣斑塊面積顯著減?。?6.1±2.0％vs8.3±1.9％，P＜0.05）;脂質含量明顯降低（28.5±3.4％vs14.4±2.1％，P＜0.05）;并