應(yīng)用ShRNA研究HBX基因表達(dá)和三氧化二砷對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡特性的影響.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文應(yīng)用ShRNA研究HBX基因表達(dá)和三氧化二砷對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡特性的影響姓名：雷建華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)傳染病學(xué)指導(dǎo)教師：楊旭賀興鄂20060601豎主堂焦絲苧塑墅!壘旦!!墜塑!結(jié)果從質(zhì)粒pEcob6成功PCR擴(kuò)增出HBVX全基因并克隆至質(zhì)粒pEasy、pCEP4和pcDNA31(十)，酶切、PCR及測(cè)序均證實(shí)真核表達(dá)載體質(zhì)粒pCEP4X和pcDNA31()X構(gòu)建成功。轉(zhuǎn)染后成功篩選出耐Hygromyc

2、in或Neomycin的陽性細(xì)胞克隆，并能傳代培養(yǎng)。PCR、RTPCR和WestemBlot鑒定證實(shí)IIBX表達(dá)。shRNA表達(dá)載體pXi1、pXi一2和pXi一3轉(zhuǎn)染至HepG2pCEP4X后RTPCR和WesternBlot分析表明序列特異性pXi1、pXi2能顯著抑制HBX的表達(dá)，而序列無關(guān)對(duì)照pXi一3則對(duì)IIBX的表達(dá)水平無影響。201amol／LAs203作用36小時(shí)后細(xì)胞凋亡比明顯增高，但shRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過程也可使細(xì)

3、胞凋亡比增高。不同HBX表達(dá)水平的細(xì)胞組As203作用后細(xì)胞凋亡比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P005)，而不同HBX表達(dá)水平的細(xì)胞As203作用后caspase3活性卻有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P001)。表達(dá)HBX的細(xì)胞caspase3活性下降，特異性shRNA抑制HBX表達(dá)后caspase3活性可再次增高。As203作用使HepG2和HepG2pCEP4X細(xì)胞p53蛋白水平上調(diào)和p53相對(duì)活性比增強(qiáng)。表達(dá)HBX后As203誘導(dǎo)的p53蛋白水平有所上調(diào)，但顯