柑橘采后生防菌34-9抗真菌活性物質(zhì)的研究.pdf

1、柑橘采后因真菌性病害造成的損失嚴(yán)重，其中以青霉(Penicilliumitalicum)和綠霉(Penicilliumdigitatum)為主。雖然國內(nèi)外已篩選出了多株柑橘采后生防菌，但能夠開發(fā)應(yīng)用的較少。其原因多是由于生防菌單獨(dú)使用難以達(dá)到化學(xué)殺菌劑的效果，或活菌制劑的發(fā)酵工藝不夠完善。這就迫切地需要對(duì)生防菌的拮抗機(jī)理進(jìn)行研究，以針對(duì)性的提高其抑菌活性或改良其生物學(xué)特性。 本研究旨在明確Kloeckeraapiculata(3

2、4-9)產(chǎn)生活性抑菌物質(zhì)的拮抗機(jī)理。對(duì)拮抗物質(zhì)進(jìn)行提取分離，檢測(cè)其抑菌譜和生理生化性質(zhì)；摸索其純化條件和發(fā)酵條件；由離體、活體實(shí)驗(yàn)確定其抑菌作用的有效性，主要結(jié)果如下： 1.確定了活性物質(zhì)的提取方法。以不同飽和度的(NH4)2SO4沉淀不能分離出抑菌成分；采用乙醚浸提或萃取可分別從抑菌區(qū)域、無菌發(fā)酵液中分離出抑菌活性物質(zhì)；經(jīng)20s×4的微波處理可有效破碎酵母細(xì)胞，破碎液經(jīng)乙醚萃取也可獲得抑菌物質(zhì)。 2.對(duì)粗提取物的生理生

3、化性質(zhì)研究結(jié)果表明：粗提物對(duì)柑橘、葡萄、芒果的主要采后病害均有一定抑制作用；經(jīng)121℃高溫高壓處理20min、胰蛋白酶、蛋白酶K處理，都不能破壞其活性；4℃下保存一個(gè)月，仍能維持較強(qiáng)的抑菌作用。在酵母菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期就可檢測(cè)到抑菌物質(zhì)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)木期達(dá)到較高值，穩(wěn)定期后，其產(chǎn)量無顯著變化。經(jīng)顯色反應(yīng)表明，粗提取物呈酸性，其中含有酚類和黃酮類的特征基團(tuán)；確定了苯：乙醚(5:5)為TLC展開的最佳條件，并在Rf值為0.78處回收獲得了經(jīng)純化的活

4、性組分；在45％的甲醇-水洗脫下，經(jīng)HPLC全波長(zhǎng)檢測(cè)，證明了回收組分的純度。 3.發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果表明：在自然pH值條件下，接種量為1％，250ml的搖瓶中裝液量為50ml，培養(yǎng)24h時(shí)，活性物質(zhì)的產(chǎn)量較大。離體條件下，10倍稀釋的粗提物可完全抑制柑橘青霉(P.italicum)病原孢子萌發(fā)；活體果實(shí)實(shí)驗(yàn)表明，粗提物水溶液可顯著抑制柑橘綠霉(P.digitatum)，處理4d后，防腐率達(dá)96％以上，6d后，粗提物的防腐作用顯著