bFGF與C-myc在急性白血病中的表達及臨床意義.pdf

1、近年的研究表明，與實體腫瘤一樣，血液腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與血管新生和信號傳導也有密切的關系。目前這一研究已逐漸成為眾多學者關注的熱點。在腫瘤形成過程中，異常的血管生成發(fā)揮著關鍵作用。腫瘤生長依賴于血管生成。腫瘤細胞具有誘導血管生成的潛能，這種潛能必需在生長因子的刺激下才能轉化為發(fā)揮作用的表型。 bFGF是最強的血管生長因子之一，是一種十分重要的正性調控因子。近年來，研究表明，白血病患者體液中bFGF水平亦較正常對照明顯升高，骨髓中有

2、明顯的血管新生現象。體內體外的各種實驗均證實了bFGF對于血管內皮細胞的促增值活性。人們發(fā)現白血病細胞有bFGF和/或bFGFR的異常表達，bFGF可以通過自分泌或旁分泌直接刺激白血病細胞，通過加強酪氨酸激酶信號傳導通路水平促進細胞增殖。 C-myc蛋白是一個終末分化的負性調節(jié)因子，在生長控制、分化發(fā)育和細胞凋亡中均有重要作用。需有第2個生長信號(關鍵性生長因子)刺激，通過酪氨酸激酶信號傳導通路調節(jié)核轉錄因子C-myc的表達，才能抑制細

3、胞凋亡，促使細胞進入增生狀態(tài)導致腫瘤發(fā)生。 本研究實驗組為急性非淋巴白血病(ANLL)初診患者58例，急性淋巴白血病(ALL)初診患者22例，對照組為ANLL完全緩解患者(CR)40例，ALL完全緩解患者(CR)4例，血小板減少性紫癜患者(ITP)20例。應用RT-PCR方法檢測bFGF和C-myc在細胞中的表達，目的在于研究血管新生和bFGF與C-myc信號傳導通路之間的內在聯系?？梢愿羁痰恼J識急性白血病，并為急性白血病的治

4、療提供新的靶點。 實驗材料與方法: 1、實驗材料 (1)藥品與試劑：MML-V(Promega公司)，RNA酶抑制劑，隨機引物，1)kq酶(上海生工生物工程技術服務有限公司)，PBS液，dNTPs，5×逆轉錄反應緩沖液，10×PCR緩沖液，特異引物(上海生工生物工程技術服務有限公司)，瓊脂糖。 (2)實驗器械：低溫離心機，RT-PCR儀，電泳儀，紫外透射反射分析儀 2、實驗方法 研究對象為

5、ANLL初診患者58例，ALL初診患者22例。對照組為ANLL(CR)40例，ALL(CR)4例，血小板減少性紫癜患者(ITP)20例。收集患者的骨髓液行分離出單個核細胞，提取細胞總RNA及cDNA的合成后，根據引物的反應條件行PCR反應。取15μl擴增產物經2％瓊脂凝膠電泳，觀察結果并拍照。根據資料的性質選用x<'2>檢驗和精確概率法，使用SPSS11.0統計學軟件對實驗結果進行處理。 實驗結果: 1、bFGF的表達

6、 bFGF在初診ANLL的表達較CR高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異；初診ALL的表達較CR高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異。bFGF在初診ANLL的表達較ITP高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異；初診ALL的表達較ITP高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異。 2、C-myc的表達 C-myc在初診ANLL的表達較CR高，x<'2>檢驗P值小

7、于0.05，有統計學顯著差異；初診ALL的表達較CR高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異。c-myc在初診ANLL的表達較ITP高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異；初診ALL的表達較ITP高，x<'2>檢驗P值小于0.05，有統計學顯著差異。 討論: 實體瘤中的血管新生現象已被人們普遍認可。近年人們發(fā)現白血病中同樣有血管新生現象的存在。bFGF是成纖維細胞生長因子(FGFs)中的一員，是

8、最強的血管生長因子之一。Gruber等報道毛細胞性白血病(HCL)患者的血清和骨髓中檢測到高水平的bFGF，并且具有生物學活性。異常升高的bFGF可刺激纖溶酶原激活物的釋放，從而產生纖溶酶，，纖溶酶一方面可以降解細胞外基質，參于血管新生的過程。bFGF還可通過自分泌/旁分泌機制誘導血管內皮細胞表達VEGF，進一步證實了bFGF與腫瘤血管新生的密切關系。本文用RT-PCR方法檢測bFGF在AML和ALL骨髓細胞的例數高于正常對照組(P<0

9、.05)，提示bFGF在急性白血病有較高的表達，與急性白血病的發(fā)生發(fā)展有密切關系。 C-myc基因表達失控在腫瘤發(fā)生中起關鍵作用。一些研究已經證實白血病細胞株HL-60細胞存在C-myc基因高表達。本實驗檢測出C-myc在初診ALL和ANLL表達的例數高于正常對照組(P<0.05)與上述結論相符。許多研究證實，腫瘤的發(fā)生與生長因子信息傳遞通路中一些癌基因蛋白的參與有關。生長因子與其受體相結合，酪氨酸激酶活性增高，激活Ras-MAPK通路

10、，最終信息傳至核內，激活核內的轉錄因子C-myc，屬于促生長的早期應答蛋白。本實驗在初診ALL和ANLL中檢測到bFGF和C-myc均升高，由此可推測可能bFGF通過酪氨酸激酶信號傳導通路調節(jié)轉錄因子C-myc的表達，促進白血病的發(fā)生。 對bFGF和C-myc的檢測使我們認識到血管新生和信號傳導在白血病的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要意義。迄今為止白血病的預后很差，其治療手段仍以化療和骨髓移植為主，生存率低，而且影響病人的生存質量。因