Math1誘導的前庭毛細胞再生的轉分化過程與細胞增殖.pdf

1、目的：
　　1)檢驗前庭膜性迷路對腺病毒載體的通透性,從而探索在外淋巴中直接給腺病毒載體對于內(nèi)耳毛細胞再生研究的可行性。
　　2)新生鼠的耳蝸上皮轉染math1產(chǎn)生異位新生的毛細胞,本實驗為了解前庭上皮細胞是否存在同樣的具有分化潛能的感覺上皮。
　　3)探索math1誘導的毛細胞樣的細胞的轉分化的形態(tài)學過程及分化條件、特點。
　　方法：
　　Ad-math1-EGFP載體的構建及其轉染前庭上皮后表達的mat

2、h1蛋白的檢測;本實驗以鼠為研究對象,以中路窩途徑快速采集標本,分別建立前庭膜迷路整體培養(yǎng)和前庭終器培養(yǎng)的模型,并檢驗兩個不同模型轉染Ad-math1-EGFP載體后的效應;采用前庭終器培養(yǎng)的模型,使正常培養(yǎng)的前庭上皮感染Ad-math1-EGFP,對轉染病毒后不同時間點的標本固定,部分采取冰凍切片,運用免疫組織化學進行染色后觀察、采集實驗數(shù)據(jù);采用前庭終器培養(yǎng),并建立高、低增殖活性的前庭感覺上皮的模型,分別將它們轉染Ad-math1-

3、EGFP,一定時間后固定、免疫組織化學染色后觀察、采集實驗數(shù)據(jù);本實驗以萊卡熒光顯微鏡、SP2或者SP5的共聚焦顯微鏡對標本進行觀察并采集實驗數(shù)據(jù)。
　　結果：
　　1)體外培養(yǎng),膜迷路整體模型和前庭終器培養(yǎng)模型的首次建立。前者,盡量保持前庭膜迷路的完整性并將它們貼壁培養(yǎng),培養(yǎng)液中給腺病毒載體,模擬在體時外淋巴給病毒;后者,去除前庭的膜性非感覺上皮并將剩余的感覺上皮貼壁培養(yǎng),培養(yǎng)液中給腺病毒載體,模擬在體時內(nèi)淋巴給病毒。

4、r>　　2)膜迷路整體培養(yǎng)模式,培養(yǎng)液中給Ad-math1-EGFP載體,上皮細胞在非感覺上皮區(qū)出現(xiàn)極少量毛細胞樣的細胞;前庭終器培養(yǎng)模式,培養(yǎng)液中給Ad-math1-EGFP載體,非感覺上皮區(qū)有大量的方格狀細胞出現(xiàn),并在此處出現(xiàn)大量的毛細胞樣的細胞。
　　3)異位新生的毛細胞樣的細胞具有纖毛,多成簇出現(xiàn),部分細胞共用一簇纖毛;細胞形態(tài)多樣,呈現(xiàn)為多邊形態(tài)、毛細胞樣的形態(tài)及兼有二者特點的柱狀。
　　4)機械損傷的前庭終器,在

5、損傷處的支持細胞增殖且在math1誘導下出現(xiàn)新生的毛細胞樣的細胞;正常培養(yǎng)的前庭終器感覺上皮區(qū)極少數(shù)增殖細胞且在math1誘導下未見新生的毛細胞樣的細胞;慶大霉素造模后前庭終器感覺上皮區(qū)幾乎沒有增殖細胞且在math1誘導下未見新生的毛細胞樣的細胞。
　　5)Math1誘導的新生毛細胞樣的細胞多來源于一些高增殖活性、方格狀的細胞,其分化的過程中多不經(jīng)歷細胞的增殖,但分裂中的細胞有可能被轉染并具備毛細胞的特點。
　　結論：

6、>　　1)前庭膜性迷路是阻止腺病毒載體從外淋巴進入內(nèi)淋巴的屏障。
　　2)新生鼠的前庭上皮中存在一類高增殖活性的細胞,貼壁培養(yǎng)時,它們可以遷延、增殖,并在mathl誘導下可轉分化為異位的毛細胞樣細胞。
　　3)具有高增殖潛能的前體細胞轉染math1后易產(chǎn)生毛細胞樣的細胞。
　　4)math1誘導的毛細胞樣的細胞的過程是一個不依賴于細胞增殖的轉分化的過程。
　　5)毛細胞樣的細胞形態(tài)多樣,并具備其行使功能的基本結構